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苯并[a]芘是一种多环芳烃(PAHs),在海洋与大气环境中广泛存在,是许多有机物质在不完全燃烧及还原过程中热分解产生的。其经过多种I相代谢酶的作用被活化后,能转化为在化学性质上活泼的化合物并对机体发挥多种毒害作用,具有很高的致癌性,是一种很强的致畸、致突变剂,同时又是一种具有很强生殖毒性的内分泌干扰物。茶多酚可以有效的清除活性氧和脂类自由基,具有抗癌、抗突变、抗遗传毒性,而对于活体水平上抗畸变,拮抗苯并[a]芘生殖毒性方面由于动物模型的局限性,在国内外尚无报道。本研究在茶多酚优化提取的基础上,首次采用d-rR品系日本青鳉鱼为模式生物,利用微注射仪进行精确定量,然后采用腹腔注射方法研究了茶多酚的抗畸变作用,并尝试研究了茶多酚对苯并[a]芘致青鳉鱼生殖毒性、遗传毒性及致癌毒性的影响,并用逆转录-实时荧光定量PCR法检测肝脏组织内的CYP酶(CYP1A1、CYP1B、CYP2A、CYP2C、CYP2D、CYP3A)、GST基因(mGST、GST-A)激素合成酶(CYP17A、CYP19、CYP11A、VTG2、CHG-H),以及细胞凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、GSH-Px)等的mRNA表达情况,从基因表达水平对其可能机理进行探讨。主要结论如下:1.以紫阳群体种绿茶为原料,采用二元回归正交组合设计方案,建立了料液比、乙醇体积分数、超声温度、超声时间、超声波功率5因素与茶多酚提取率之间的回归优化模型,对绿茶茶多酚提取率的影响大小依次为料液比>乙醇体积分数>超声温度>超声时间>超声波功率,在料液比1:36(g/mL),乙醇体积分数77.6%,超声时间38 min,超声温度72℃,超声波功率248.4 W,最高可达21.78%,较传统乙醇浸提方法提取时间短,提取率提高了8.56 %。2.首次利用特殊模式生物进行畸形研究,结果表明茶多酚对苯并[a]芘致日本青鳉鱼后代畸形具有一定的拮抗,单独注射苯并[a]芘组青鳉鱼后代畸形率达到15.13%,显著高于对照;茶多酚拮抗组后代畸形率有所下降,除茶多酚最低剂量组(20μg/gB[a]P+2μg/g TP)外,其他组均较B[a]P组差异显著。实时荧光定量PCR结果表明,苯并[a]芘试验组对CYP1A1、CYP1B、CYP2A、CYP2C、CYP2D有轻微诱导,并显著抑制雌鱼mGST和GST-A的表达,同时茶多酚可明显抑制CYP1A1基因和谷胱甘肽-S转移酶基因mGST和GST-A的表达。表明茶多酚的抗畸变机理可能跟抑制CYP1A1基因表达以及加速苯并[a]芘代谢形成有关。3.本试验尝试利用青鳉鱼这一新型模型生物,研究了茶多酚对苯并[a]芘的遗传、生殖毒性,此研究在国内为尚属首例。结果表明20ug/g的苯并[a]芘可以显著抑制雌鱼的生殖能力,产卵量、受精率、孵化率降低,孵化时间延长。苯并[a]芘可能遗传毒性,发现苯并[a]芘暴露后显著降低了子代卵的质量,如卵直径下降,卵黄蛋白含量降低以后后代畸形率上升。而茶多酚拮抗组具有明显的恢复作用,受精率、卵直径、卵黄蛋白含量等均和对照无显著差异,由此可见,茶多酚可以拮抗苯并[a]芘诱导的生殖毒性,此类研究在国内外尚属首例,苯并[a]芘对CYP17、CYP19、CYP11A、Bcl-2、Bax、GSH-Px等无显著影响,但可以抑制VTG2,CHG-H的表达,而茶多酚拮抗组VTG2表达和对照没有降低,50μg/gTP组也显著升高,由此说明茶多酚可以有效促进VTG2的表达。同时在代谢方面,苯并[a]芘单独处理组青鳉鱼CYP1A1 mRNA,又显著抑制日本青鳉鱼雌鱼肝脏GST-A和GST-M二相代谢酶的表达。由此可以说明,茶多酚对苯并[a]芘生殖能力的调控可以与调节VTG2、CHG-H基因表达有关。