【摘 要】
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心脏钠通道的α亚基Nav1.5在心脏动作电位的产生和传导过程中起着重要的作用,其基因突变会导致恶性心律失常或猝死。2008年王擎研究小组通过酵母双杂交技术筛选出与Nav1.5相
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心脏钠通道的α亚基Nav1.5在心脏动作电位的产生和传导过程中起着重要的作用,其基因突变会导致恶性心律失常或猝死。2008年王擎研究小组通过酵母双杂交技术筛选出与Nav1.5相互作用的蛋白质MOG1,发现MOG1可以通过调节细胞膜SCN5A的表达而影响钠电流密度,揭示了MOG1对心脏钠离子通道具有重要调节作用。最近又发现MOG1基因突变可直接导致Brugada综合征。目前有关MOG1在心脏中的生理功能尚不清楚,为了探讨MOG1在心脏中的功能及其调控心脏钠通道的分子机制,本研究应用酵母双杂交系统筛选与MOG1相互作用的蛋白质,希望通过此途径找到突破点。 实验首先以p3×FLAG-CMV-7.1-MOG1为模板扩增得到MOG1全长cDNA,构建诱饵载体pGBKT7-MOG1。将其转化酵母AH109细胞检测是否激活报告基因表达,再将其转化酵母Y187细胞检查其表达情况和细胞毒性作用。然后将pGBKT7-MOG1和人胎脑cDNA文库进行Yeast Mating,通过营养缺陷型培养基和α-gal分析来筛选阳性克隆。将得到的148个阳性克隆再一次进行营养筛选,经过α-gal分析、PCR分类、回复性实验排除假阳性克隆。然后将候选阳性克隆测序,并把测序结果在数据库中进行同源性比对,最终确定两种可能和MOG1相互作用的蛋白:EPB42(Erythrocyte membrane protein band4.2)、BTBD6( BTB(POZ) domain containing6)。 综上所述,本实验鉴定出了两种与MOG1相互作用的蛋白,下一步拟通过Co-IP、GST Pull down以及细胞共定位进行确认。如果EPB42和BTBD6确实和MOG1存在相互作用的话,将对阐明MOG1在心脏中的生理功能以及MOG1相关心律失常疾病的发病机制提供了新的线索。
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