论文部分内容阅读
目的：人牙髓干细胞(human Dental pulp Stem Cells, hDPSCs)和大多数干细胞一样,具有多向分化潜能,形成新的功能细胞,从而保持牙齿组织生长和衰退的动态平衡,研究发现在牙本质的发生、牙齿的发育及牙髓损伤修复过程中均存在牙髓细胞的增殖、分化及多种生长因子的表达上调。表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)在hDPSCs增殖分化中的作用在国内外报道较少,本实验在体外分别观察EGF、bFGF以及二者共同作用对hDPSCs的增殖和分化的影响,进一步探讨EGF、bFGF促进hDPSCs增殖与分化的可能机制,从而为hDPSCs移植促进牙齿的再生提供一定的实验基础与理论依据。方法：1对冻存的hDPSCs常规细胞复苏、培养24小时,分为实验组和对照组,在实验组中将生长因子EGF、bFGF按不同浓度(5、10、20、50、100ng/ml)分别加入hDPSCs培养板孔中,对照组不加任何生长因子,每组设5个复孔,4天后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法于波长490nm测光密度(OD)值,比较不同浓度EGF、bFGF的对hDPSCs增殖的影响,确定刺激hDPSCs增殖的最大效应浓度；2取传代培养的hDPSCs,按1×104/ml浓度接种培养,24小时后换液,将最大效应浓度的生长因子加入实验组(EGF组、bFGF组、EGF+bFGF组)中,对照组(不加任何因子),每组设5个复孔,分别在加入生长因子后的第0、1、3、5、7d,测其OD值,分析各组hDPSCs增殖的情况；3常规复苏培养冻存的hDPSCs,实验分组同上,分别将最大效应浓度的EGF、bFGF、EGF+bFGF加入各组hDPSCs培养基中并分别于1、3、5、7、14天,测定hDPSCs的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,进一步分析EGF、bFGF、EGF+bFGF在hDPSCs分化中的作用。4.统计分析实验结果采用SPSS17.0统计软件进行处理,实验数据均以均数土标准差(x±s)表示,P<0.05表示有统计学意义。结果：1.EGF、bFGF最大有效浓度分别为：50ng/ml、20ng/ml;2.(1)在0-7天内实验组和对照组的OD值随时间延长而增大；(2)EGF组、bFGF组在加入生长因子后OD测定值在的第0、1天与对照组相比变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05),第3、5、7天OD值显著增加,高于对照组,有统计学意义(P<0.05)；(3) EGF+bFGF组在加入生长因子后的第0、1天OD值与EGF、bFGF组及对照组相比变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05),加入生长因子后的第3、5、7天OD值均高于EGF、 bFGF组和对照组,有统计学意义(P<0.05)。3.(1)在1～14天实验组和对照组的ALP活性均随时间延长而增大；(2)EGF组和EGF+bFGF组在1、3天与对照组相比ALP活性无明显差异(P>0.05),在第5、7、14天ALP活性高于对照组,有统计学差异(P<0.05)；(3)在1-14天bFGF组ALP活性与对照组无明显差异(P>0.05)；(4)EGF+bFGF组在加入生长因子后的第1、3天ALP活性与EGF、bFGF组相比无明显差异(P>0.05),加入生长因子后的第5、7、14天ALP活性均高于EGF、bFGF组,但与EGF组无统计学意义(P>0.05)。结论：1生长因子EGF和bFGF最大效应浓度分别为：50ng/ml、20ng/ml;2生长因子EGF能有效促进hDPSCs增殖与分化,生长因子bFGF能促进hDPSCs增殖,对hDPSCs分化作用不明显；3EGF、bFGF在促hDPSCs的增殖可能具有相互协同或叠加的作用,而在分化方面无协同作用。