SiRNA沉默Fra-1基因对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响

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目的:探讨沉默Fra-1基因调控人胃癌细胞增殖与凋亡的可能机制。方法:实验将人胃癌MGC-803细胞分为四组:转染组(SiRNA组),空白对照组(Blank),转染试剂对照组(MOCK),阴性对照组(NC)。以脂质体作为载体转入细胞中,转染后在荧光显微镜下观察转染率。SiRNA转染后,CCK-8法检测转染24、48、72h的细胞增殖抑制率,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,用RT-PCR检测细胞Fra-1、NF-κB、COX-2mRNA的表达变化; Western Blot法测定Fra-1、NF-κB、COX-2蛋白的表达变化。结果:1.转染率结果:特异性SiRNA转染成功的细胞在荧光显微镜下呈绿色荧光,48h转染率达70%。2.特异性SiRNA转染组能抑制人胃癌细胞的增殖,而其余3组未见明显抑制增值效应。特异性SiRNA转染组能促进人胃癌细胞凋亡(P﹤0.05),其他3组没有明显差异(P﹥0.05)。3.转染后对Fra-1表达的影响:RT-PCR和Western Blot检测特异性SiRNA转染组的Fra-1的表达低于其余3组(P﹤0.05),而其余3组之间没有明显差别(P﹥0.05)。4.转染后NF-κB及COX-2表达的影响:RT-PCR和Western Blot检测特异性SiRNA转染组的NF-κB、COX-2的mRNA及蛋白水平均低于其余3组(P﹤0.05),而其余3组之间没有明显差别(P﹥0.05)。结论:1、特异性SiRNA转染人胃癌MGC-803细胞后可以沉默Fra-1。2、沉默Fra-1能抑制人胃癌细胞株MGC-803细胞的增殖,促进其凋亡,推测其机制可能是通过Fra-1/NF-κB/COX-2通路下调NF-κB、COX-2因子的表达实现的。
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