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金银花(Lonicerae japonicae Flos)为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物的干燥花蕾,是一种药食同源类植物,在全国分布较为广泛。现代研究表明,金银花具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗内毒素、降血脂和清热解毒等多种药理活性。金银花提取液已被广泛应用于多种中药配方及具有功能性的食品中,如双黄连注射液,金银花口含片、王老吉凉茶、和其正凉茶等。有机酸类天然产物是金银花中的主要成分,具有非常好的生物活性,同时其也是评价金银花品质的重要指标。本论文一方面对三个主要种植金银花地区的金银花样品进行了品质评价研究,包括总酚和总黄酮含量测定、不同抗氧化方法抗氧化能力、主要化学成分含量测定等;另一方面本论文还对金银花中五种重要的有机酸类成分进行了高效提取富集工艺的研究,建立了一套快速简便的色谱分析检测方法和高效的提取工艺。本论文为合理、高效的利用金银花植物资源提供了理论指导,为我国金银花资源的深度开发提供了数据支持。本论文的主要研究内容及结果如下: 1.建立了HPLC快速检测金银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸、3,4-二咖啡酰奎尼酸及4,5-二咖啡酰奎尼酸的方法: 色谱柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm I.D.,5μm);流动相:0.1%(v/v)乙酸水溶液(A)-0.1%(v/v)乙酸乙腈:0.1%(v/v)乙酸甲醇,3∶1(v/v)溶液(B);梯度洗脱条件:0-5 min,2-8% B;5-15 min,8-12% B;15-30 min,12-15% B;30-35 min,15-21% B;35-46 min,21-24% B;46-52 min,24% B;52-66 min,24-36% B;66-70min,36-100% B;70-75 min,100%B。流速:1mL/min;柱温:30℃;检测波长:320 nm;进样量:5μL。 2.通过对不同地区金银花样品进行总酚和总黄酮含量、不同抗氧化方法抗氧化能力和主要成分含量的测定,进行金银花样品品质评价研究。 山东金银花样品总酚总黄酮含量最高分别为137.520±3.15 GAE mg/g,0.656±0.022 RE mg/g;在DPPH自由基清除实验中,河南样品对DPPH自由基的清除能力最弱其IC50值为0.336±0.023 mg/mL,山东平邑样品对DPPH自由基的清除能力最高IC50值为0.211±0.028 mg/mL;在ABTS总抗氧化能力测定实验中,河北巨鹿表现出较高的抗氧化能力;在铁还原力、FRAP实验中,山东平邑样品均表现出较好的抗氧化结果;绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸的含量是金银花样品中含量最高的两种活性物质,山东平邑样品拥有有机酸类成分含量相对较多,综合以上实验结果,山东平邑金银花样品品质相对较佳。 3.对绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎尼酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸及4,5-二咖啡酰奎尼酸微波辅助低共熔溶剂提取工艺参数进行了Box-Behnken(BBD)实验设计工艺优化,确定了最优的提取参数,同时采用大孔吸附树脂对目标化合物进行富集分离。 低共熔溶剂:体系1.3-丁二醇/氯化胆碱 组成比例摩尔比6∶1 含水量10% 微波提取工艺参数:提取温度60℃ 液固比9∶1 mL/g 提取时间20 min 在上述优化条件下进行验证实验,绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎尼酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸及4,5-二咖啡酰奎尼酸平均提取率分别为26.07±1.25,0.148±0.007,0.930±0.018,23.67±1.03,8.85±0.38 mg/g。采用NKA-9树脂对目标化合物进行富集分离,回收率分别为79.25%,80.03%,85.96%,86.01%和85.52%。