第一部分SGT与Hsp90β相互作用并在细胞凋亡时向核转位 SGT(thesmallglutamine-richtetratricopeptiderepeat(TPR)一containingprotein)最初是以酵母双杂交方式筛到的一个能与细小病毒的非结构蛋白NSl相互作用的蛋白。此后的研究表明SGT还能与生长激素受体、TGFβ超家族成员Myostatin及Hsp70、Hsc70等相互作用，并能在突触囊泡的表面与Csp、Hsc70形成Csp＼Hsc70＼SGT形成复合物而表现出一种分子伴侣活性。我们实验室以前的研究表明，SGT具有促凋亡活性，超表达SGT的SMMC一7721细胞对凋亡诱导剂更敏感，加速细胞凋亡，并表现出细胞核碎裂等细胞凋亡特征。但其促凋亡的分子机制并不明确。 为了进一步研究SGT的功能，我们以SGT为诱饵蛋白，通过酵母双杂交技术筛选人胎肝cDNA文库，得到了与SGT结合的蛋白质Hsp90β、Bcl2L12、CD99抗原、泛素。在本文中，我们着重研究Hsp90p与SGT之间的关系。随后，我们在体外结合实验中，通过原核表达的GST-SGT融合蛋白与HeLa细胞裂解液共孵育，证明了SGT和Hsp90β在体外的结合。通过免疫共沉淀的方法证明了SGT和Hsp90β在体内的相互作用，并且用Hsp90特异性的功能抑制剂GA处理细胞后，它们的这种体内相互作用明显减弱。而激光共聚焦显微镜下观察到SGT和Hsp90D主要分布在细胞浆并在胞浆有很好的共定位。但是，GA处理细胞后，定位在细胞核的SGT明显增多。通过分别对HeLa和H1299细胞的胞核、胞浆蛋白的免疫印迹分析，这一结果得到进一步证实。结合我们以前对SGT促凋亡的研究发现，我们用激光共聚焦显微镜观察了在STS诱导凋亡的HeLa细胞中SGT的亚细胞分布。结果发现，与正常细胞相比较而言，在凋亡细胞中SGT的核转位现象显著存在。进一步研究发现，在STS诱导凋亡的HeLa细胞中SGT和Hsp90p的体内相互作用也受到明显抑制。因此，我们推测SGT的亚细胞分布状态与Hsp90D及凋亡密切相关。 第二部分有关SGT稳定性的研究 TPR基序是一个包含34个具有简并性氨基酸残基的多肽重复序列，它介导多种生物学过程。SGT(smallglutamine-richTPR—containingprotein)是一个含有TPR基序的蛋白质。蛋白结构分析表明SGT由3个相同长度的区域组成：三个串联重复的TPR结构域位于SGT蛋白的中间，通常介导SGT与其他蛋白质的相互作用；其C末端有一段富含谷氨酰胺的序列，介导多肽内疏水氨基酸的相互作用；而N端介导SGT分子自身的二聚化。早在1998年，CelinaCziepluch等人通过酵母双杂交的方式，以细小病毒H—l的非结构蛋白NSl为诱饵在鼠的cDNA文库中筛出了SGT。随后，他们又从人的胎盘中分离出SGT。人类与鼠的SGT同源性高达91％，它们分别编码313个、314个氨基酸。SGT能与一系列蛋白质相互作用，如生长激素受体、TGFβ超家族的Myostatin和HIV的Vpu以及Hsp90等等。同过CSP／Hsc70／SGT复合物的形成，SGT对Hsc70的分子伴侣活性产生一定影响。最近研究表明SGT是细胞进行成功有丝分裂的一个重要因素。另一方面，我们实验室的研究表明，过表达SGT的细胞对凋亡诱导剂的敏感性增加。但是到目前为止，我们对SGT的这一系列生理功能的产生机制还不清楚，对SGT的降解途径还缺少研究。本文中，我们发现用Hsp90的功能抑制剂GA处理细胞后，导致SGT的蛋白水平下降，并且这种蛋白水平的下降程度与GA的处理浓度成正比。我们已知Hsp90的大部分底物蛋白是通过蛋白酶体途径降解的。可以因此我们推测Hsp90能够稳定SGT，用GA处理后可能导致了SGT的泛素化降解而致SGT的蛋白半衰期缩短。 第三部分SGT对p21的影响 细胞周期负调控蛋白为一组周期素激酶抑制剂(cyclin-dependentkinaseinhibitors，CKI)的核蛋白。CIP／KIP家族是CKD类蛋白家族之一。CIP／KIP家族有三个成员：p2l、p27、p57。其中p21通过其不同的位点与CDK及cyclin结合后抑制G1期的cyclin-CDK。 人们对于p21的转录调控已有广泛研究。依据p53的参与情况，p21的转录调控可以被分为p53依赖性和非p53依赖性方式调节。p21通过蛋白酶体途径降解。最近一项研究表明，WISp39能与p21相互作用，并通过WISp39／p21／Hsp90三元复合物的形成而指导p21的正确折叠并增加其稳定性。WISp39是一个能与Hsp90相互作用的含TPR基序的蛋白。而SGT也是含TPR基序的蛋白家族中的一员，并且也能与Hsp90相互结合。本文中我们观察到在细胞中过表达SGT能提高p21的蛋白水平。我们以前的研究发现，在凋亡细胞中，SGT向细胞核聚集。通过构建定位在细胞核的SGT的质粒，我们发现p21的蛋白水平的增高与定位在核内的SGT密切相关。这些研究发现可能为研究SGT参与凋亡的机制提供新的线索。