目的 从人脐血中分化诱导出具有高度活性的NK细胞。构建体外筛选模型,筛选出g MYL6系列小肽中能增强NK细胞活性的小肽。在活性肽介入后,探究NK细胞对K562细胞增殖和凋亡方面的影响,并确定其抑制肿瘤细胞的作用方式,最终阐述其抑癌机制。方法1用Ficoll法从脐血中分离出单核细胞进行诱导分化出NK细胞,采用流式细胞术验证NK细胞的成熟与活性,以保证获得80%以上的成熟NK细胞。2以K562细胞为靶细胞构建体外筛选模型,小肽浓度设置25μM、50μM、100μM三个浓度梯度进行筛选,用CCK-8方法筛选出能增强NK细胞毒作用的小肽,确定一种作用最强的小肽进行下一步研究。3探究NK细胞对靶细胞增殖和凋亡的影响,采用流式细胞术评估细胞周期阻滞。4采用AO/EB荧光染色观察靶细胞凋亡,流式细胞术Annexin v/PI双染法检测细胞凋亡。5通过蛋白质印记实验探究小肽提高NK细胞杀伤活性的途径,并通过实时荧光核酸定量PCR进行验证,初步确定其抑癌机制。结果1从脐血中诱导分化出成熟具有活性的NK细胞。2经过筛选25μM小肽D增强NK细胞杀伤活性最为显著,其他浓度的各个小肽也有不同程度的作用。3小肽D辅助NK细胞抑制K562细胞增殖,促使细胞周期停滞在G2/M期,并促进靶细胞凋亡。4最终杀伤靶细胞的作用方式可能是通过NK细胞释放毒性蛋白穿孔素和表面CD107a蛋白的增加来实现的。结论研究表明小肽具有提高NK细胞的细胞毒作用,推断可能是通过增加NK细胞的穿孔素分泌和CD107a蛋白的表达来实现的,最终抑制肿瘤细胞的生长和促进肿瘤细胞的凋亡。因而,小肽可作为NK细胞的辅助性药物来增强其抑瘤作用,这为后续研究奠定了基础。图19幅;表12个;参125篇。