【摘 要】
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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体是一种很有发展潜力与应用前景的重组蛋白,它在大肠杆菌发酵以包涵体及可溶性蛋白两种形式表达.为了大量获得该重组蛋白,该论文就这种蛋
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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体是一种很有发展潜力与应用前景的重组蛋白,它在大肠杆菌发酵以包涵体及可溶性蛋白两种形式表达.为了大量获得该重组蛋白,该论文就这种蛋白的纯化作了三方面的工作:(1)建立了一种简单、高效的包涵体复性方法.该方法首次提出了在复性缓冲液中联合添加蛋白聚集抑制剂(0.4ML-精氨酸、0.5M尿素和氯化钠)的组合策略,显著减少了复性过程中无活性的蛋白聚集体的形成,提高了复性收率.此外,连同半连续流加稀释复性方法的采用大大提高了复性浓度(0.9g/l)和复性率(51％)从而达到较传统稀释复性高5倍的复性浓度及4倍的复性收率.复性后蛋白通过一步金属亲和层析纯化达到95％以上的纯度,且获得35％的活性蛋白总收率.(2)初步研究了不同发酵条件生产的包涵体的形态及性质差异.(3)建立了两种简单高效的可溶性蛋白分离方法.一种是结合金属亲和层析与阳离子交换色谱分离的方法,收率为42％,最终纯度达到95％;另一种是结合PEI沉淀与离子交换色谱分离的方法,收率为40％,最终纯度达到90％.
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