红花草莓茎尖组培快繁与叶片离体再生体系建立

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草莓属植物开白花,红花草莓(Fragaria×Potentilla)为属间杂种,花朵呈红色或粉色,色彩鲜艳,是一种观赏兼食用的新型花卉,可应用于园林绿化及室内盆栽观赏,具有良好观赏价值与开发潜力。本试验以红花草莓品种‘四季红’的匍匐茎茎尖为外植体,分析了培养基、外源激素等对初代培养、继代增殖和生根培养的影响,建立了红花草莓无菌试管苗离体快繁体系,为红花草莓的良种繁育打下了基础,对实现红花草莓工厂化繁苗具有重要意义。同时以‘四季红’、‘粉佳人’、‘俏佳人’、‘粉公主’、‘小桃红’、‘红玫瑰’、‘莓红’、‘SF14’、‘26SF’、‘X1-3’10个品种品系叶片为外植体,分析了基因型、植物生长调节剂、暗培养、接种方式和AgNO3浓度对愈伤组织诱导、不定芽分化和植株再生的影响,建立了红花草莓叶片高效离体再生体系。主要研究结果如下:在红花草莓‘四季红’茎尖培养中,通过比较1/2MS、MS、MS+BA 0.5 mg·L-1三种初代培养基对‘四季红’茎尖萌发率的影响发现,MS和MS+BA 0.5 mg·L-1为初代培养基的茎尖萌发率基本没有差异,均显著高于1/2MS,分别为64.43%和65.33%,其中MS+BA 0.5 mg·L-1为初代培养基可产生少量增殖现象。比较了不同激素组合处理对红花草莓‘四季红’继代扩繁及生长发育状况的影响,获得继代扩繁的最适培养基为:MS+BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,增殖系数为4.23,平均株高为3.80 cm。最佳生根培养基为:1/2MS+NAA 0.1 mg·L-1,生根率达到98.50%,平均根数为18.23条。驯化5d后将组培苗移栽至细沙:蛭石=1:1的沙床中,28 d后统计成活率为83.9%,且植株生长旺盛根系发育良好。以10个红花草莓基因型的叶片为外植体进行离体培养,建立了红花草莓叶片离体再生体系。结果表明,基因型是影响红花草莓叶片不定芽分化的主要因素。在比较的10个红花草莓基因型中,6个再生出了不定芽,不定芽分化率由高到低依次为‘粉佳人’>‘俏佳人’>‘26SF’>‘14SF’>‘莓红’>‘小桃红’。比较不同激素配比对叶片愈伤组织及不定芽诱导的影响,综合效果来看TDZ诱导效果良好,且TDZ与NAA的组合效果好于IBA组合,品种‘粉佳人’叶片愈伤组织及不定芽诱导的最适培养基为:MS+TDZ 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1。在此培养基上不定芽分化率最高达到44.57%,平均每叶片再生2.93个不定芽;叶片分别以近轴面向下放置和远轴面向下放置两种方式进行接种,结果表明接种方式对叶片愈伤组织诱导率没有影响。但远轴面向下放置时,叶中部拱起呈桥状,叶边缘伤口接触培养基能加速诱导进程,当培养至14 d时开始萌发愈伤组织,55 d时开始着生不定芽。在叶片近轴面向下放置时,叶面呈U字型,叶边缘不能接触培养基,诱导速度相对较慢;比较不同暗培养天数对叶片再生不定芽的诱导,发现暗培养14 d能有效提高不定芽分化率,此时的不定芽分化率为63.67%,平均叶片再生不定芽数为3.27个。当暗培养天数大于14 d时不定芽分化率呈下降趋势,暗培养28 d时已显著低于对照组仅为10.12%。通过在培养基内添加一定浓度的AgNO3发现,当AgNO3浓度为2 mg·L-1时可提高叶片的再生频率,但随着浓度的继续升高,反而会抑制叶片不定芽再生。
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