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研究目的:对非结核分枝杆菌(Non-tuberculosis mycobacteria,NTM)临床分离株进行菌种鉴定;了解不同抗生素对NTM不同菌种的体外抑菌活性;研究脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制。研究方法:1、非结核分枝杆菌的菌种鉴定:通过16S rRNA的引物将278株NTM临床分离株的DNA进行聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR),并将菌株的16S rRNA基因片段进行测序,在基本局部比对搜索工具(Basic LocalAlignment Search Tool,BLAST)比对,进行菌种鉴定;通过rpoB和hsp65的引物将70株脓肿分枝杆菌临床分离株的DNA进行PCR,并将菌株的rpoB和hsp65基因片段进行测序,在BLAST上进行比对,从而将脓肿分枝杆菌分为不同亚种。2、非结核分枝杆菌的药敏试验:使用ALamar蓝微孔板二倍稀释法(MicroplateAlamar Blue Assay, MABA)对所有NTM临床株进行包括阿米卡星、头孢西丁、克拉霉素、阿奇霉素、亚胺培南、莫西沙星、左氧氟沙星、利奈唑胺、利福平、乙胺丁醇和替加环素在内的11种药物药敏试验,对实验结果进行包括最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)值范围、MIC50、MIC90、敏感比例、中等敏感比例、耐药比例等数据的分析,并将脓肿分枝杆菌的不同亚种-Abscessus亚种和Bolletii亚种进行χ2或Fisher精确概率法检验,了解两亚种间对不同抗生素耐药比例的区别。3、脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制:脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药与erm(41)基因28位点的碱基进行相关性分析。研究结果:1、非结核分枝杆菌的菌种鉴定:根据16S rRNA将278株NTM临床株又分为快生长分枝杆菌(Rapidly growing mycobacterium,RGM)和慢生长分枝杆菌(Slowly growing mycobacterium,SGM),其中RGM100株(36%),包括脓肿分枝杆菌(25%)、偶发分枝杆菌(8%)、Fuerth分枝杆菌(2%)和龟分枝杆菌(1%);SGM178株(64%),包括胞内分枝杆菌(47%)、堪萨斯分枝杆菌(12%)和戈登分枝杆菌(5%)。根据rpoB和hsp65基因片段将脓肿分枝杆菌又分为Abscessus亚种和Bolletii亚种,其中Abscessus亚种45株,Bolletii亚种25株。2、非结核分枝杆菌的药敏试验:对于RGM,除偶发分枝杆菌对头孢西丁耐药,以及Abscessus亚种对克拉霉素耐药,大部分RGM临床株对阿米卡星、阿奇霉素、利奈唑胺、亚胺培南、头孢西丁、克拉霉素和莫西沙星敏感或中度敏感,对左氧氟沙星耐药。对于SGM,大部分胞内分枝杆菌临床株对克拉霉素敏感,对利奈唑胺耐药;大部分堪萨斯分枝杆菌临床株对阿米卡星、利福平和乙胺丁醇敏感。3、脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制:erm(41)测序成功的28株Abscessus亚种中,23株为克拉霉素耐药株,5株为敏感株,耐药株中22株erm(41)的28位点为T,余1株为C,5株敏感株的28位点均为C。研究结论:1、非结核分枝杆菌的菌种鉴定:使用16S rRNA可将278株NTM再分为7种不同菌种,RGM中脓肿分枝杆菌占RGM的大部分,而龟分枝杆菌和Fuerth分枝杆菌数量较少;SGM中胞内分枝杆菌占大部分,而戈登分枝杆菌数量较少;使用rpoB和hsp65可将脓肿分枝杆菌再分为Abscessus亚种和Bolletii亚种。2、非结核分枝杆菌的药敏试验:阿米卡星、阿奇霉素、利奈唑胺、亚胺培南、头孢西丁、克拉霉素和莫西沙星对大部分RGM有较好的抑菌活性,而左氧氟沙星对大部分RGM抑菌活性较差。克拉霉素对胞内分枝杆菌有较好的抑菌活性,而利奈唑胺的抑菌活性较差;阿米卡星、利福平和乙胺丁醇对堪萨斯分枝杆菌的抑菌活性较好。3、脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制:erm(41)基因的28号位点碱基可能与克拉霉素耐药有相关性。