1,25-二羟维生素D₃[1,25（OH）₂D₃]是维生素D₃的活性形式,具有调节细胞增殖分化、调节免疫系统功能、调节神经系统功能等多种生物学效应。此外,1,25（OH）₂D₃对多种组织来源的肿瘤细胞系具有抑制增殖和诱导分化的作用。本课题在实验室已有工作的基础上,首先研究了1,25（OH）₂D₃及其三种新型类似物EB1089、MC1288、MC903对入骨肉瘤细胞系（HOS-8603）增殖的调节,发现1,25（OH）₂D₃、EB1089、MC1288和MC903对HOS-8603细胞的增殖均有明显的抑制作用。 为了进一步探讨细胞内信号转导系统在1,25（OH）₂D₃调节HOS-8603细胞增殖分化过程的作用,我们用Western blot的方法研究了1,25（OH）₂D₃对MAPK家族成员（ERK1/2、JNK1/2、p38）和PKC活性的调节。结果表明,1,25（OH）₂D₃可以快速诱导JNK1/2、p38及PKC的磷酸化,并且这些作用具有浓度依赖性,但是对于ERK1/2,不仅不能快速诱导其磷酸化,反而会抑制血清诱导的ERK1/2磷酸化。由于MAPK家族信号转导通路与细胞的增殖分化过程关系密切,提示1,25（OH）₂D₃对MAPK激酶活性的调节可能是其抑制HOS-8603细胞增殖的机制之一。 作为一种甾体激素,1,25（OH）₂D₃的许多生物学效应是通过其特异性的核受体VDR介导的。本实验室已有的工作也证明HOS-8603细胞中有VDR蛋白的表达。用反义核酸技术阻断VDR表达后,1,25（OH）₂D₃抑制HOS-8603细胞增殖的作用减弱。为了克服反义核酸技术的缺点（阻断特异性和效率较低）,进一步明确VDR在1,25（OH）₂D₃调节HOS-8603细胞增殖中的作用并深入阐明VDR与细胞内MAPK信号转导通路在介导1,25（OH）₂D₃效应过程中的相互关系,我们构建了VDR-RNA干扰的表达载体（pSilencer2.1-U6-VDR1/2-neo/hygro）,并转染