光控原核细胞中蛋白质降解与表达的研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kensenwey
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控制细胞内蛋白水平对于基础生物学和合成生物学研究有重要意义。目前主要通过化学和温度方法调控蛋白质水平。然而化学小分子的毒性及难以清除特性,温度变化引起的细胞生理变化等问题限制了这些方法的应用。  本研究基于光敏蛋白VIVID分别开发了原核细胞中光控蛋白质降解和光控基因表达系统。光控蛋白质降解系统中,构建的两种光控蛋白降解模块以mCherry作为报告蛋白,光诱导降解效率有10倍左右。将光控降解模块与氯霉素乙酰转移酶融合,在含有氯霉素的培养基中,只有在光照条件下大肠杆菌才能生长。光控沙门氏菌基因表达系统有200多的诱导倍数,同时本底泄露非常低。该系统具有非常快的表达动力学,同时表达水平具有光强依赖性。添加基因回路cI/PλO12后,该系统由光照抑制变为光照激活,光照激活系统也有很好的诱导性质。此外,将沙门氏菌感染巨噬细胞后,光控基因表达系统仍然能够工作。  光控蛋白质降解系统和光控基因表达系统可以很便捷的调控细胞内蛋白质水平。通过这些研究可以为基础生命科学及合成生物学研究提供有用的工具,并可用于生物工程,代谢工程等应用研究领域。
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