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研究背景心脏重构在心力衰竭(heart failure,HF)的病理生理进展中发挥着重要作用。心脏重构主要包括神经重构、结构重构、电重构等,过度及不可逆的重构将导致心脏功能障碍及电生理紊乱。目前用于HF患者抗心脏重构的药物包括血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)和β肾上腺素能受体(βadrenergic receptor,βAR)阻滞剂等,但低血压、干咳、心动过缓等相关药物副作限制了二者在临床中的使用。micro RNA-145(miR-145)在心血管系统中呈高丰度表达,但miR-145在HF心脏重构中的作用及机制鲜有报道。研究目的探讨miR-145在心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后HF大鼠心脏结构重构及电重构中的作用,并探讨其可能的作用机制。研究方法第一部分:选取体重为220g-250g,年龄为7-8周雄性Sprague-Dawley大鼠作为研究对象并给予结扎左前降支冠状动脉诱导MI建立HF模型,对照组实施Sham术。构建模型4周后采用HE染色、Masson染色、超声心动图、Western blot等手段评估miR-145在HF心脏结构重构中的相关作用及机制。第二部分:选取体重为220g-250g,年龄为7-8周雄性Sprague-Dawley大鼠作为研究对象按第一部分方法建立HF模型,对照组实施Sham术。构建模型4周后分析各组大鼠II导联体表心电图、程序性电刺激、动作电位时程、L型钙电流、Ca2+瞬变、Ca2+波、心肌细胞缩短率及Ca2+转运相关蛋白等以评估miR-145在HF心脏电重构中的相关作用及机制。研究结果第一部分:HF模型建立4周后,HF组、AD-EGFP组梗死周边区组织miR-145表达相较于Sham组均显著降低(P<0.05)。AD-miR-145组miR-145表达则较HF组、AD-EGFP组显著上升(P<0.05)。AD-miR-145组、M+C组HW/BW、LW/BW、心梗面积、CVF水平及胶原蛋白I、胶原蛋白II、α-SMA表达量均较HF组、AD-EGFP组显著下降(P<0.05)。超声心动图发现基础状态下AD-miR-145组、M+C组心脏LVEDD、LVESD、EF及FS较HF组、AD-EGFP组显著改善(P<0.05);ISO刺激时AD-miR-145组、M+C组LVEDD、EF及FS变化率较HF组、AD-EGFP组显著降低(P<0.05)。Western Blot提示,相较于HF组、AD-EGFP组,AD-miR-145组p-Ca MKII、Ca MKII表达量显著降低(P<0.05),而β2AR、GNAI3、p-Akt、p-CREB表达则显著上升(P<0.05)。第二部分:HF模型建立4周后,AD-miR-145组、M+C组QT间期、QTc间期较HF组、AD-EGFP组显著缩短(P<0.05)。Langendorff心脏离体灌流分析提示AD-miR-145组、M+C组心梗周边区APD90、APD90交替阈值及心律失常评分均较HF组、AD-EGFP组显著改善(P<0.05)。L型钙电流(ICa-L)分析表明基础状态下AD-miR-145组、M+C组ICa-L峰值较HF组、AD-EGFP组显著增加(P<0.05);失活后恢复时间较HF组、AD-EGFP组显著缩短(P<0.05);在ISO刺激下,AD-miR-145组、M+C组ICa-L变化率较HF组、AD-EGFP组显著下降(P<0.05)。细胞内Ca2+稳态分析表明基础状态1HZ恒电场刺激下AD-miR-145组、M+C组收缩期Ca2+瞬变值、心肌细胞缩短率(Fractional shortening,FS)、Ca2+波发生率较HF组、AD-EGFP组显著改善(P<0.05);3HZ恒电场刺激下AD-miR-145组舒张期Ca2+瞬变值、FS、Ca2+波发生率较HF组、AD-EGFP组、M+C组显著改善(P<0.05)。在ISO状态1HZ恒电场刺激下,AD-miR-145组、M+C组Ca2+波发生率较HF组、AD-EGFP组显著降低(P<0.05);3HZ恒电场刺激下AD-miR-145组舒张期Ca2+瞬变值、FS、Ca2+波发生率较HF组、AD-EGFP组、M+C组显著改善(P<0.05)。Western Blot提示,AD-miR-145组、M+C组p-PLB(Thr16)、p-Ry R(Ser2814)较HF组、AD-EGFP组显著降低(P<0.05);SERCA2a表达量较HF组、AD-EGFP组显著上升(P<0.05)。研究结论1.HF大鼠心脏梗死周边区组织miR-145表达量显著降低;2.miR-145可分别通过促进β2AR-GNAI3信号通路、抑制Ca MKII信号通路改善HF心脏结构重构;miR-145可显著降低HF大鼠心肌细胞βAR刺激反应性,但在ISO刺激下AD-miR-145组心力储备并未显著降低;3.miR-145可有效抑制HF引起的左室电重构,该作用可能与miR-145介导的高效、不完全性Ca MKII抑制有关。miR-145过表达能通过改善APD离散度、提高APD90交替阈值、缓解心肌细胞内Ca2+紊乱改善左室电重构。此外在高频刺激下,AD-miR-145组心肌细胞舒张期Ca2+瞬变值、Ca2+波发生率优于传统药物(ACEI联合βAR阻滞剂)治疗。