肿瘤组织的发生发展是一个复杂的过程,肿瘤细胞与内皮细胞之间存在一系列的相互作用。肿瘤细胞和内皮细胞共培养的研究焦点在于肿瘤细胞在内皮细胞血管生成过程中的作用,很少有研究关注内皮细胞与肿瘤细胞相互作用过程中,内皮细胞对肿瘤细胞恶性的影响,而且大部分的相互作用研究停留在二维培养水平。共培养体系的构建需要考虑多种因素,为了构建适合于乳腺癌细胞4T1和血管内皮细胞HUVECs共培养的系统,本研究利用海藻酸钠、明胶、壳聚糖、透明质酸等生物材料制备水凝胶,用于包裹4T1和HUVECs。从细胞来源、细胞比例及总数、生存环境、相互作用方式等方面设置不同的共培养组,从肿瘤细胞生长情况进行分析,在三维环境中构建了适合4T1与HUVECs相互作用的共培养体系。本研究主要对与HUVECs共培养后的4T1基质金属蛋白酶MMP9,多药耐药蛋白MDR1,乳腺癌干细胞标志物CD44和CD24蛋白的表达进行检测,发现共培养后的4T1细胞的MMP9、MDR1、CD44的表达量升高,而CD24的表达降低。相关mRNA的表达结果与蛋白检测结果一致,证明与HUVECs共培养促进4T1恶性相关分子标志物的表达。利用共培养系统将HUVECs与乳腺癌干细胞4T1-CSC共培养,免疫荧光检测MMP9、MDR1、CD44和CD24蛋白表达进行检测,通过qRT-PCR检测MMP9、MDR1、CD44、CD24、,乳腺癌干细胞标志物Sca1、干细胞分子标志物Nestin、Tert、Nanong和Sox2的m RNA的表达,实验结果表明共培养后的4T1-CSC恶性相关标志物及干细胞相关标志物表达上调。与HUVECs共培养促进4T1及4T1-CSC的恶性相关标志物表达,说明HUVECs对肿瘤细胞的促进支持作用,这可能可以作为肿瘤治疗的靶点,为肿瘤治疗的研究提供研究思路。