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枣是鼠李科枣属植物,是原产我国的重要果树资源。本研究以酸枣、赞皇大枣、苹果枣和骏枣的花药为试材,对影响花药培养的适宜时期、预处理、蔗糖浓度以及植物生长调节剂进行研究,获得花药的再生植株。以酸枣组培苗叶片、嫩茎、花药为试材,诱导愈伤组织,得到最佳植物生长调节剂组合;以酸枣花粉和悬浮细胞系为材料分离原生质体,找到适宜的酶解组合,酶解时间以及甘露醇浓度。为倍性育种奠定前期基础。主要研究结果如下:1.获得花药再生植株(1)通过形态学和细胞学观察,确定小孢子各发育时期与花器官外部形态特征的关系。花药培养的最佳时期为单核靠边期,此期花蕾为黄绿色,花药为淡黄色。(2)低温处理不同时间对酸枣、苹果枣和赞皇大枣花药有明显影响,处理之间存在显著差异(P<0.05)。酸枣低温处理7 d,诱导率和分化率最大,而处理3 d有利于再生;苹果枣低温处理3 d,诱导率最大,而处理5 d和7 d有利于愈伤组织的分化和再生;赞皇大枣花药处理3 d,诱导率和分化率均达到最大。低温处理对骏枣花药无影响。(3)甘露醇处理对酸枣、苹果枣和赞皇大枣花药有影响,处理之间存在显著差异(P<0.05)。酸枣和苹果枣花药在甘露醇中处理3 d,诱导率达到最大;赞皇大枣花药在甘露醇中处理4 d,诱导率最大。骏枣花药对甘露醇处理作用不明显。(4)酸枣和赞皇大枣在蔗糖浓度为6%时,有利于愈伤组织的诱导;骏枣在蔗糖浓度为9%时,有利于愈伤组织的诱导。(5)适于诱导花药愈伤组织的基本培养基为MS+TDZ+NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂,不同基因型TDZ和NAA的浓度不同,TDZ 0.5 mg/L和NAA 0.5 mg/L适于骏枣和赞皇大枣花药培养,TDZ 0.5 mg/L和NAA 1.0 mg/L适于酸枣花药培养,TDZ 1.5 mg/L和NAA 0.5 mg/L适于苹果枣花药培养。试验得到酸枣再生苗25株,赞皇大枣5株,苹果枣2株,骏枣2株。2.愈伤组织的诱导和调控酸枣花药诱导愈伤组织效果较好。适于酸枣叶片诱导愈伤组织的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂。适于愈伤组织继代的培养基为MS+TDZ 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L+CH(600 mg/L)+Gln(300 mg/L)+ME(500 mg/L)+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂,悬浮培养基为不加琼脂的继代愈伤的培养基。3.原生质体的分离(1)酸枣花粉四分体原生质体分离酶液为,蜗牛酶(1.0%)+纤维素酶(0.5%)+甘露醇0.3 mol/L+0.1% MES,酶解4 h效果最佳。(2)酸枣叶片愈伤组织悬浮细胞系原生质体分离酶液为,纤维素酶(10 g/L)+离析酶(5 g/L)+甘露醇0.7 mol/L+0.1% MES,酶解时间16 h效果最佳。