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目的:慢性高糖血症是内皮功能紊乱的重要原因。本研究观察高糖对内皮细胞自噬的影响,并探索茶多酚通过自噬对高糖状态下的内皮细胞发挥保护作用。方法:体外培养的牛主动脉内皮细胞培养在0.4和4mg/L的茶多酚、33mM的高糖和4mg/L的茶多酚与33mM的高糖相混合的培养基。用Western Blot方法测量干预后内皮细胞中LC3-II、SQSTM1/p62和Beclin-1蛋白的含量;信号蛋白mTOR及其磷酸化蛋白p-mTOR(2448)的水平。结果:(1)茶多酚剂量依赖(P<0.05)和时间依赖(P<0.05)地上调LC3-II的蛋白水平,4mg/L的茶多酚具有最强的自噬诱导效应(P<0.05),并能升高Beclin-1蛋白的水平(P<0.05)和降低SQSTM1/p62蛋白的水平(P<0.05)。在溶酶体抑制剂BAF的作用下,茶多酚诱导的LC3-II蛋白水平更进一步地升高(P<0.05)。(2)在6-24 h,高糖时间依赖地升高LC3-II的蛋白水平(P<0.05)。同时升高了SQSTM1/p62蛋白的水平(P<0.05),降低了Beclin-1蛋白的表达水平(P<0.05)。在溶酶体抑制剂BAF干预后,24h高糖作用下LC3-II蛋白水平并未进一步升高(P>0.05)。(3)在高糖干预延长至72h后,LC3-II的蛋白水平显著下降(P<0.05)。同时,72h高糖作用降低了Beclin-1蛋白的表达水平(P<0.05),但未见SQSTM1/p62蛋白的蛋白水平的改变(P>0.05)。在溶酶体抑制剂BAF干预后,72h高糖作用下的LC3-II蛋白水平轻微地升高(P<0.05),并显著地低于正常对照组(P<0.05)。(4)茶多酚与高糖共处理24h,显著地降低了高糖单独作用引起的LC3-II蛋白水平升高(P<0.05)。同时,显著地降低了高糖单独作用引起的SQSTM1/p62蛋白的蛋白水平升高(P<0.05),显著地升高了高糖单独作用引起的Beclin-1蛋白水平下降(P<0.05)。在BAF干预下,与单独24h高糖处理相比较,茶多酚显著地升高了高糖状态下LC3-II的蛋白水平(P<0.05)。(5)茶多酚对72h高糖的干预,显著地升高了高糖作用引起的LC3-II蛋白水平下降(P<0.05)。同时,显著地降低了SQSTM1/p62蛋白的蛋白水平(P<0.05),显著地升高了高糖单独作用引起的Beclin-1蛋白水平下降(P<0.05)。在BAF干预下,与单独72h高糖处理相比较,茶多酚显著地升高了高糖状态下LC3-II的蛋白水平(P<0.05)。(6)在24h高糖、72h高糖和茶多酚对高糖干预下,自噬通路蛋白mTOR、磷酸化蛋白p-mTOR(2448)蛋白表达水平在各个组间未见改变(P>0.05),p-mTOR(2448)/mTOR比例数值在各个组间未见改变(P>0.05)。结论:4mg/L茶多酚能增强内皮细胞自噬流水平,而33mM高糖抑制了内皮细胞的自噬流,4mg/L茶多酚可以缓解33mM高糖引起的自噬流抑制。4mg/L茶多酚和33mM高糖引起的内皮细胞自噬流改变不经mTOR信号通路。此次研究的结果提示茶多酚的干预可能是预防糖尿病心血管并发症的一种潜在的可行方法。