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环境激素是指环境中具有与人和动物体内激素相似的化学结构和作用的一类化学物质。这一类化合物进入人体发挥激素的作用;影响体内激素的合成、运输、释放和代谢;扰乱内分泌系统、生殖系统及神经系统的功能;造成机体免疫和生殖等功能的障碍。以雌激素及其类似物为主的类固醇激素是环境激素中的一类。目前已经在近海水域中检测到超过正常水平的雌激素。鉴于微生物在降解和环境污染物治理中所具有的独到的优势,本文拟初步探索海洋微生物降解类固醇激素的可能性和可行性。主要结果如下: 1.从汕头港和南澳岛海水养殖区采集环境样品,筛选类固醇激素降解菌株39株,大多数菌株可以降解五种底物的3-4种,菌株X和Y3能够降解本实验用的全部底物,菌株N8和Y18只能降解雌二醇、N9和N12只降解胆固醇以及Y20只利用雌三醇。优势菌N1、N3和N6属于Vibrio,菌株C、Y2分别为P.ganghwense和A.venetianus。 (1)从菌液浓度、总蛋白量、降解率及蛋白表达比较分析,证明菌株N1、N3、N6和N13降解睾丸酮的能力。对具强降解睾丸酮、宽降解谱的菌株N3进行降解睾丸酮的条件优化和生理生化分析: (2)利用Plackett–Burman实验和响应面法中心复合设计(CCD)法,确定菌株N3降解睾丸酮的最佳条件为:起始pH为7.95、酵母提取物为68.06mgL-1、氯化钠为31.2gL-1、硫酸铵为1.75gL-1、温度为25℃、磷酸氢二钾为0.25gL-1、葡萄糖为0.25gL-1和转速为150rpm。在最佳条件下,菌株的睾丸酮降解率与模型预测相符。 (3)菌株N3为革兰氏阴性细菌,有运动性,进行发酵型产酸,不能利用色氨酸生成吲哚,不能利用柠檬酸钠为碳源,不含有丙酮酸脱羧酶。菌株对高浓度(150mgml-1)的氨苄青霉素、羧苄青霉素、青霉素、壮观霉素和低浓度的链霉素、萘咛酮酸、卡那霉素有抵抗作用,对低浓度的氯霉素、四环素和利福平敏感。结合16SrRNA基因序列进化树分析,将菌株命名为Vibriosp.N3。 2.柘林湾网箱鱼排养殖区筛选雌酮和雌二醇降解菌: (1)筛选得到雌酮降解菌株38株,雌二醇降解菌103株。测定72h内降解菌降解0.1mM底物降解率,多数雌酮降解菌降解率在65%-85%之间,只有4株的降解率在85%以上,没有达到90%的菌株;101株雌二醇降解菌多数底物降解能力较强,强底物降解能力的菌株接近总数1/4,少数菌株的雌二醇降解率达到90%,最高的ZE2-59达到91.47%。 (2)随机从雌酮和雌二醇降解菌中分别抽出12株和16株进行菌株的16SrRNA基因鉴定。12株雌酮降解菌都属于Vibrio菌属,9株与标准菌株V.communisR-40496(T)高度相似。16株雌二醇降解菌分布比较广,种属较多分属于变形菌门α、β和γ3亚门4目4科4属,10株属于Vibrio,其中与V.communis相似性最高有5株。 3.选择“南海基金DFH11航次”第一航段和第二航段海水样品,筛选17β-乙炔基雌二醇降解菌。第一航段和第二航段分别筛选得到11株和43株降解菌。 从第一航段和第二航段分别抽出5株和34株做菌株的16SrRNA鉴定和比对分析。第一航段株菌经鉴定按照最高相似度分类属于Vibrio属的两个不同的种,4株为V.rotiferianus为优势菌种。第二航段34株菌分属于Nitratireductor、Martelella、Labrenzia、Aurantimonas、Hoeflea、Ruegeria、Citreicella、Citromicrobium、Kordiimonas、Thalassospira、Halomonas和Pseudomonas等12个菌属,有的菌属有6株菌如Nitratireductor和Thalassospira;有的只有1株如Aurantimonas、Hoeflea及Citromicrobium,其他的大多为2到5株不等。