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目的研究在Transwell小室环境条件下, ADSCs分别对青年人和老年人来源成纤维细胞功能的影响及其差异,为脂肪干细胞运用于抗衰老奠定实验基础。方法1.从择期手术中获得废弃的人体皮下脂肪组织,分离并培养成人ADSCs,显微镜观察ADSCs的形态特征。2.选取生长状态良好的第三代ADSCs用流式细胞仪FCM进行细胞表面抗原鉴定。3.从择期手术中获得废弃的青年人(<25岁)和老年人(>60岁)皮肤组织,分别分离培养成纤维细胞,显微镜观察成纤维细胞的形态特征。4.将ADSCs分别和青年人以及老年人成纤维细胞进行间接共培养,同时以非共培养的青年人以及老年人成纤维细胞作为空白对照,显微镜观察共培养后成纤维细胞的形态变化。。5. MTT检测共培养后成纤维细胞的增殖情况。6. RT-PCR检测共培养后成纤维细胞的Ⅰ型胶原、MMP-1、β-半乳糖苷酶的mRNA表达。结果1. FCM检测ADSCs细胞表面抗原结果:CD44,CD90阳性表达,CD34阴性表达。2. ADSCs形态特征:ADSCs细胞呈长梭形,原代细胞生长较慢,传代后生长速度加快,传至3代后镜下可见细胞呈“旋涡状”分布。3.共培养后老年人和青年人成纤维细胞形态特征:老年人成纤维细胞体积较大,形状不规则,呈多突起的扁平星状;共培养后则逐渐转变为长梭型。青年人成纤维细胞形状规则,多呈长梭型;共培养后形态无明显变化。4. MTT法测定成纤维细胞增殖结果:共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞增殖分别高于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),且青年人实验组增殖高于老年人实验组(P=0.000)。5. RT-PCR检测各组成纤维细胞Ⅰ型胶原,MMP-1,β-半乳糖苷酶mRNA表达结果:(1)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞增殖分别高于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),且青年人实验组增殖高于老年人实验组(P=0.000)。(2)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞的Ⅰ型胶原和β-半乳糖苷酶mRNA表达分别高于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),且青年人实验组的Ⅰ型胶原和β-半乳糖苷酶mRNA表达均高于老年人实验组(P=0.002、P=0.000)。(3)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞的MMP-1mRNA表达分别低于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),青年人实验组的MMP-1mRNA表达低于青年人实验组(P=0.055),该差异无统计学意义,此结果的产生可能与共培养后青年人成纤维细胞和老年人成纤维细胞增殖均较活跃,产生的MMP-1均较少有关。结论1. ADSCs原代细胞生长较慢,传代后生长速度加快,传代后的ADSCs经表面抗原检测后纯度较高。2.青年人成纤维细胞呈长梭形,细胞生长速度较快;老年人成纤维细胞形态不规则,呈长梭形或粗大条索形,细胞质内有深色颗粒状物质沉积,细胞生长速度较慢。3. ADSCs与成纤维细胞共培养,能促进不同年龄成纤维细胞的增殖能力和胶原蛋白以及β-半乳糖苷酶的分泌能力,同时减少MMP-1的分泌。