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背景:胶质瘤是中枢神经系统肿瘤中常见而又难治疗的恶性肿瘤,即使运用现代显微神经外科技术、化疗、放疗等综合治疗措施后,胶质瘤患者预后仍不理想。胶质瘤的这种不良预后与胶质瘤细胞的侵袭性,以及化疗、放疗等的毒副作用相关,因此需要开发新的有效治疗方法以清除手术后残余浸润的肿瘤细胞,以提高恶性胶质瘤患者的生存率。免疫治疗作为一种特殊的治疗方式引起了研究者的广泛关注。本实验室在原有的个体化免疫治疗的基础上,研究新的特异性主动免疫治疗方法,即采用新的瘤苗制备方法,不但保持了原有方法的优点,而且提高了抗原激发/提呈能力,已经在动物实验中取得了较好的抗癌效果。在此基础上,本实验把这一特异性主动免疫治疗方法运用于胶质瘤的实验研究。一、主动免疫对C57BL/6小鼠GL261胶质瘤生长的抑制作用目的:在既有的免疫治疗研究基础上,研究新的免疫治疗方法对胶质瘤生长的抑制作用。方法:6-8周龄雌性C57BL/6小鼠15只,按随机数字法随机分成3组,每组5只。建立C57BL/6小鼠GL261胶质瘤免疫模型。第1组:无菌生理盐水1ml,做对照组。第2组:未处理瘤苗+免疫佐剂(old method)。第3组:处理后瘤苗+免疫佐剂(new method)。每只小鼠接种3 ×106GL261胶质瘤细胞,通过观察小鼠的肿瘤增殖情况验证主动免疫治疗对肿瘤的抑制作用。结果:肿瘤增殖情况:用处理后瘤苗+免疫佐剂免疫动物后,GL261肿瘤的生长趋势变缓,肿瘤大小明显比NS对照组小,p=0.0052,差异有统计学意义。并且处理后瘤苗+免疫佐剂组肿瘤的大小可明显小于未处理瘤苗+免疫佐剂组,p=0.0347,差异有统计学意义。结论:处理后瘤苗+免疫佐剂方法治疗对C57BL/6小鼠GL261胶质瘤起到了一定的抑制作用。二、主动免疫对C57BL/6小鼠GL261胶质瘤生长的抑制机制研究目的:研究新的免疫治疗方法对胶质瘤生长抑制作用的免疫机理。方法:6-8周龄雌性C57BL/6小鼠15只,按随机数字法随机分成3组,每组5只。建立C57BL/6小鼠GL261胶质瘤免疫模型。第1组:无菌生理盐水1ml,做对照组。第2组:未处理瘤苗+免疫佐剂(old method)。第3组:处理后瘤苗+免疫佐剂(new method)。通过外周血免疫学指标检测:ELISA检测免疫后小鼠外周血中抗GL261抗体浓度、体外检测淋巴细胞转化及杀伤、流式检测CD4+IL-2+、CD8+、CD8+IL-2+细胞来研究主动免疫对C57BL/6小鼠GL261胶质瘤抑制的机制。结果:外周血免疫学指标检测:(1)ELISA检测抗GL261抗体滴度:与NS对照组比较,用处理过的GL261瘤苗抗原加佐剂后免疫动物,可以明显上调血浆中抗GL261抗体的浓度。在血浆稀释度为1:528000时,免疫组和NS对照组的比较,采用t检验,p=0.012,差异有统计学意义。(2)淋巴细胞转化试验:显微镜下观察,与NS免疫的小鼠外周血的淋巴细胞比较,处理后瘤苗+免疫佐剂免疫后的PBMC明显变大变亮变圆,淋巴细胞转化明显。BrdU检测结果显示,处理后瘤苗+免疫佐剂免疫后的小鼠外周血中PBMC转化增殖能力与NS组比较明显增强,p=0.02,差异有统计学意义。(3)LDH检测淋巴细胞杀伤能力:NS组中LDH的水平(253.6±50.043 IU/ml)明显低于处理后瘤苗+免疫佐剂组的LDH水平(348.4±53.186 IU/ml),t检验得,p=0.0198<0.05差异有统计学意义。(4)流式检测免疫细胞分群:流式结果显示,用处理后瘤苗+免疫佐剂方法,CD4+IL-2+细胞的百分率可以达到4%左右,明显高于未处理瘤苗+免疫佐剂组。p=0.0286,差异有统计学意义。用处理后瘤苗+免疫佐剂方法,CD8+细胞的百分率可以达到46%左右,CD8+IL-2+细胞的百分率可以达到14%左右,明显高于未处理瘤苗+免疫佐剂组。p=0.0102,差异有统计学意义。结论:主动免疫对C57BL/6小鼠GL261胶质瘤生长的抑制可能与以下几方面有关:(1)免疫后小鼠的血浆中抗GL261抗体的浓度非常高。(2)用瘤苗免疫后的小鼠外周血中PBMC的转化增殖能力明显较NS组明显增强。(3)用处理后瘤苗+免疫佐剂免疫小鼠后,可以明显上调CD4+IL-2+细胞的百分率。可能通过上调的CD4+IL-2+细胞百分率对GL261肿瘤起明显的抑制作用。(4)用处理后瘤苗+免疫佐剂免疫小鼠后,可以明显上调CD8+IL-2+细胞的百分率。可能通过上调的CD8+IL-2+细胞百分率对GL261肿瘤起明显的抑制作用。