人参皂甙Rg1拮抗大鼠关节软骨细胞凋亡的研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hh2006pk
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目的:初步探讨人参皂甙Rg1(Ginsenoside Rg1)拮抗软骨细胞凋亡的效应及其作用机制。方法:第一步,蛋白免疫印迹法(WB)检测引起p-Akt表达升高的最适Rg1浓度,确定Rg1抑制软骨细胞凋亡的最适浓度。分为如下六组。①造模组:加入10ng/ml的IL-1β后继续培养软骨细胞24h。②-⑤浓度组:加入不同浓度的Rg1(0.1,1,10和100μg/ml)保护软骨细胞2h后,再加入10ng/ml的IL-1β继续培养24h。⑥对照组:不作任何处理。第二步,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测Rg1对软骨细胞凋亡的保护效应。分为如下三组。①造模组:加入10ng/ml的IL-1β后继续培养软骨细胞24h;②实验组:加入10μg/ml的Rg1保护软骨细胞2h后再加入10ng/ml的IL-1β继续培养24h。③对照组:不作任何处理。第三步,探讨Rg1对软骨细胞PI3K/Akt/线粒体信号通路中主要蛋白表达的影响。分为如下五组。①造模组:加入10ng/ml的IL-1β培养软骨细胞24h;②实验组:加入10μg/ml的Rg1保护软骨细胞2h后再加入10ng/ml的IL-1β继续培养24h。③Rg1组:加入10μg/ml的Rg1培养软骨细胞24h;④抑制剂组:加入25μmol/ml的LY294002和10μg/ml的Rg1孵育2h,再加入10ng/ml的IL-1β继续培养24h。⑤对照组:不作任何处理。WB法检测Rg1对p-Akt,Akt,Bcl-2,Bax,胞浆细胞色素C,线粒体细胞色素C和caspase-3蛋白表达的影响。结果:第一步结果显示(1-100)μg/ml浓度的Rg1能提高凋亡软骨细胞p-Akt的表达水平,差异有统计学意义(P <0.05)。10μg/ml与100μg/ml的Rg1对凋亡软骨细胞p-Akt蛋白表达的影响差异无统计学意义(P>0.05)。第二步结果显示Rg1对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡有保护效应。造模组TUNEL阳性细胞率高于对照组,实验组TUNEL阳性细胞率低于造模组,差异有统计学意义(P <0.05)。第三步结果显示Rg1对软骨细胞PI3K/Akt/线粒体信号通路中主要蛋白表达有影响。与对照组比较,造模组p-Akt表达降低,Bcl-2/Bax比值下降,细胞色素C从线粒体释放入胞浆,cleaved caspase-3表达增加,差异有统计学意义(P <0.05)。与造模组相比,实验组p-Akt表达升高,Bcl-2/Bax比值升高,细胞色素C的转移受到抑制,cleaved caspase-3表达降低,差异有统计学意义(P <0.05)。抑制剂组显示Rg1的抗凋亡效应被LY294002抑制。与对照组相比,Rg1组PI3K/Akt/线粒体信号通路中主要蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人参皂甙Rg1具有拮抗IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用,其保护作用通过影响PI3K/Akt/线粒体信号通路来实现。目的:比较不同剂型的氨基葡萄糖对于膝或髋骨关节炎疼痛缓解和功能改善的影响。方法:参照Cochrane协作组织(Cochrane musculoskeletal group)建议的检索策略,系统检索Medline、Embase、Cochrane对照试验数据库、Cochrane系统评价数据库,查找有关氨基葡萄糖治疗膝或髋骨关节炎(OA)的随机、双盲、安慰剂对照试验。以Jadad标准评价纳入文献质量。使用随机效应模型,应用Cohen标准化均数差(SMD)来计算效应量(ES)。通过计算I2来评价不同研究间的异质性。以疼痛缓解和功能改善作为评价氨基葡萄糖治疗OA好转的标准。其中疼痛的测量指标包括视觉模拟评分法(VAS)疼痛评分和西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)中的疼痛评分,评价关节功能的测量指标为Lequesne指数(LI)。首先评价不同剂型的氨基葡萄糖对于OA疼痛缓解的疗效,并对硫酸氨基葡萄糖(GS)组根据药物作用关节部位、分配隐藏是否正确、是否应用意向性分析方法、试验周期是否达到24周分组进行分析。再评价不同剂型的氨基葡萄糖对于OA功能缓解的疗效,并且根据试验周期是否达到24周对GS组进行分析。采用漏斗图和Egger检验评价发表偏倚。结果:19篇文献纳入本次meta分析,总共包含3159名受试者。15项研究使用GS,4项研究使用盐酸氨基葡萄糖(GH)。合并17篇报道氨基葡萄糖治疗OA疼痛缓解的效应量(ES)为-0.16(95%CI-0.34,0.01),较安慰剂差异无统计学意义,I2为78.3%。合并13篇GS对于OA疼痛缓解的ES为-0.22(95%CI-0.48,0.04),与安慰剂相比差异无统计学意义,I2为82.3%。合并4篇GH对于OA疼痛缓解的ES为-0.03,(95%CI-0.14,0.08),与安慰剂相比差异无统计学意义,组内无异质性。对GS进行亚族分析结果显示,当使用GS治疗OA时间少于24周时ES为-0.38(95%CI-0.99,0.23),差异无统计学意义,I2为88.5%;使用GS治疗OA时间大于或等于24周时ES为-0.09(95%CI-0.21,0.03),差异无统计学意义,组内无异质性。没有GH试验使用LI对OA功能改善进行评价。合并5篇GS对于OA功能改善的ES为-0.47(95%CI-0.82,-0.12),差异有统计学意义,I2为86.2%。当使用GS治疗时间少于24周时ES为-0.55(95%CI-1.22,0.11),差异无统计学意义,I2为92.9%;使用GS治疗时间大于或等于24周时ES为-0.36(95%CI-0.56,-0.17),差异有统计学意义,该组无异质性。结论:GS治疗OA超过24周不再具有疼痛缓解作用;GS治疗OA达到24周后有功能改善作用。GH治疗OA没有缓解疼痛作用。
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