阿托伐他汀钙对3T3-E1细胞增殖与分化的影响及其与内质网应激的联系

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目的:观察给予不同浓度的阿托伐他汀钙作用24小时后,对体外培养的成骨前体细胞3T3-E1增殖与分化影响,分析该过程与内质网应激信号通路的关系,初步探讨骨骼疾病的治疗靶点。方法:1.显微镜下观察成骨前体细胞3T3-E1形态结构和生长状态。2.3T3-E1细胞培养至对数期,设置对照组(不加入阿托伐他汀钙),实验组加入含不同浓度阿托伐他钙(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)的培养液继续培养细胞,24小时后利用CCK-8比色法观察阿托伐他汀钙对3T3-E1细胞增殖能力的影响,测定吸光度值。3.3T3-E1细胞培养至对数期,设置对照组(不加入阿托伐他汀钙),实验组加入含不同浓度阿托伐他钙(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)的培养液继续培养细胞,24小时后利用碱性磷酸酶测定试剂盒测定ALP活力,测定吸光度值。4.向3T3-E1细胞中加入对细胞增殖及分化作用最明显的10-6mol/L阿托伐他汀钙,干预细胞24小时后,用Trizol法提取细胞样本中总RNA,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测Runx2、Osterix及内质网应激信号通路标志性基因Bip、PERK、eIF2α的mRNA表达水平。5.统计学处理:应用SPSS 21.0软件进行统计学处理,实验数据用均数±标准差(x±s)表示,各组间比较应用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.显微镜下观察体外培养的3T3-E1细胞为贴壁生长状态,呈现梭形、多角形及不规则形等形态,细胞有的伸出突起,具备成骨细胞系生长特性。2.不同浓度的阿托伐他汀钙(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)均可促进3T3-E1细胞增殖(P<0.05),且随着阿托伐他汀钙干预浓度的增加,细胞增殖能力增强(P<0.05),以高浓度组的阿托伐他汀钙(10-6mol/L)影响最显著。3.不同浓度的阿托伐他汀钙(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)干预细胞后,各组的ALP活性均增加,且以高浓度组的阿托伐他汀钙(10-6mol/L)升高ALP活性最明显(P<0.05),呈现浓度依赖性。4.终浓度10-6mol/L的阿托伐他汀钙干预3T3-E1细胞24小时,RT-PCR结果显示,3T3-E1细胞Runx2、Osterix、Bip、PERK、eIF2α基因mRNA表达均高于对照组(P<0.05)。结论:1.阿托伐他汀钙能够促进成骨前体细胞(3T3-E1)的增殖,并且在一定范围内随着药物干预浓度的增加,促进3T3-E1细胞增殖的能力愈强。2.阿托伐他汀钙能够增加成骨前体细胞(3T3-E1)的成骨活性能力,并且高浓度组的阿托伐他汀钙促进成骨活性能力高于相对低浓度组。3.在mRNA水平,阿托伐他汀钙能够促进Runx2、Osterix的表达,参与骨代谢过程。4.在mRNA水平,阿托伐他汀钙能够上调内质网应激信号通路标志性基因Bip、PERK、eIF2α的表达,阿托伐他汀钙促进3T3-E1细胞增殖分化的作用机制可能与内质网应激信号通路相关。
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