本实验依据精子顶体表面存在大量促性腺激素释放激素受体(GnRHR)的特点和绿脓杆菌外毒素A转膜区(TLD)有将外源蛋白跨膜主动转运至细胞内的能力以及超嗜热古菌组蛋白(HphA)高度亲和DNA形成蛋白质-DNA复合物的性质,利用基因工程手段构建了两种“促性腺激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A转位肽-超嗜热古菌组蛋白融合蛋白(简称为GTH)”的表达系统,并导入表达工程菌BL21(DE3)中诱导表达GTH融合蛋白,该融合蛋白具有结合精子、主动跨膜转运和携带DNA的特性,可以作为向精子内主动转运目的DNA的工具。并自行设计了该融合蛋白GTH的表达纯化方法和中试制备工艺,经过对比两种表达载体的表达量和筛选最适培养基,最终获得可以高效表达可溶性目的蛋白的工程菌种,经过不断的小试摸索,纯化方法成熟后,对该菌进行发酵罐发酵,中试车间进行大量的生产,利用超声裂解和不同条件的稀释、层析柱纯化、蛋白酶酶切等方法,获得了相对纯度较高的大量目的蛋白,为后续相关实验提供高纯度目的蛋白。本实验目的在于为探索一种有效解决以精子为载体的动物转基因技术的有效途径奠定基础,为动物转基因技术提供一种简单易行、高效价廉的方法。依据精子顶体表面存在大量促性腺激素释放激素受体的特点,构建表达了促性腺激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A转位肽-超嗜热古菌组蛋白融合蛋白,利用该蛋白结合精子、跨膜转运和携带DNA的特性,向精子内主动转运目的DNA。研究出一套成型融合蛋白GTH的纯化方法,并制备出一定量的以供后续应用的目的蛋白,为促进转基因技术和畜牧业的发展提供一定线索和方法。