论文部分内容阅读
目的:放疗是常见且有效的癌症治疗方式之一,提高肿瘤组织的放射敏感性对提高放疗疗效至关重要。与小细胞肺癌相比,占肺癌大多数的非小细胞肺癌存在放射抵抗。本实验目的是研究GSK-3β对非小细胞肺癌自噬及放疗敏感性的影响,为肺非小细胞肺癌的个体化靶向治疗及提高放疗疗效提供新的参考蛋白。研究方法:用免疫组织化学染色检测GSK-3β在89例有随访资料的非小细胞肺癌患者组织中的表达情况,检测非小细胞肺癌组织经X射线照射后GSK-3β蛋白表达以及癌细胞自噬水平。免疫印迹检测在A549细胞中施加GSK-3β抑制剂、转染不同活性GSK-3β[wild type GSK-3β(GSK-3β-WT),constitutively active GSK-3β(GSK-3β-S9A),catalytically inactive GSK-3β(GSK-3β-K85R)]至H460细胞并经X射线照射后自噬相关蛋白的表达变化情况。应用克隆形成实验检测自噬对细胞增殖能力的影响。结果:GSK-3β表达与非小细胞肺癌的分化正相关(p=0.021)。经X射线照射后,非小细胞肺癌组织中GSK-3β蛋白表达下调,自噬相关蛋白LC3蛋白表达明显上调,p62蛋白表达下调。在H460细胞中转染激酶活性不同的GSK-3β后经X射线照射,AMPK、LC3蛋白表达下调,p62蛋白表达上调,其中转染激活型GSK-3β-S9A的作用更显著;在A549细胞中抑制GSK-3β后经X射线照射,AMPK、LC3蛋白表达上调。在H460细胞中施加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin)并经X射线照射,证实3-MA抑制非小细胞肺癌细胞自噬并抑制细胞增殖,细胞存活能力显著下降。结论:GSK-3β表达与非小细胞肺癌的分化正相关。X射线诱导部分非小细胞肺癌组织中GSK-3β表达降低并促进细胞自噬;GSK-3β调节非小细胞肺癌细胞自噬水平,抑制细胞自噬水平可能有助于增加非小细胞肺癌放射敏感性。