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本文运用细胞培养、荧光染色、RNA干扰、MTS分析、Western blotting等细胞分子生物学技术,以B淋巴瘤细胞系Raji细胞为实验对象,研究了hsBAFF刺激B细胞增殖和存活与自噬的关系,深入探讨了hsBAFF通过Ca2+/CaMKII-Akt/mTOR信号通路影响自噬在促进B细胞增殖和存活中的作用及其分子机理。具体结果如下：1 hsBAFF抑制自噬促进B细胞增殖和存活Raji细胞、或用shRNA LC3Ⅰ/Ⅱ、shRNA GFP或Ad-GFP-LC3感染的Raji细胞,采用不同浓度hsBAFF (0、0.5、1、1.5、2.5、5μg/ml)刺激12 h、或以2.5μg/ml hsBAFF刺激不同时间(0、4、8、12、24、48 h)、或通过hsBAFF (0、1、 2.5μg/ml)刺激12、24和／或48 h。之后,分析MDC荧光染色和GFP-LC3染色的细胞自噬体表现、MTS分析和细胞计数评价细胞增殖与存活表现,Western blotting检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、Beclinl等蛋白分子表达。结果显示：hsBAFF以浓度和时间依赖的方式抑制B细胞自噬表现、引发LC3Ⅱ表达下调与hsBAFF刺激B细胞增殖和存活对应；下调LC3Ⅰ/Ⅱ显示hsBAFF促进B细胞增殖和存活被降低。提示：hsBAFF抑制自噬促进B细胞增殖和存活。2 hsBAFF通过激活Akt/mTOR信号通路抑制自噬促进B细胞增殖和存活Raji细胞、用Ad-GFP或Ad-dn-Akt感染的Raji细胞、或用shRNA LC31/Ⅱ、 shRNA mTOR或shRNA GFP感染的Raji细胞,分别用雷帕霉素(100ng/ml)、 PP242(1μM)预处理2 h、或Akt抑制剂X(20μM)、CQ(5μM)预处理1h后加入2.5μg/ml hsBAFF刺激12 h或48 h。之后,MTS和细胞计数评价细胞增殖与存活表现,Western blotting检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、Beclin1、S6K1、Akt等蛋白分子的表达。结果显示：Akt抑制剂X、雷帕霉素或PP242降低p62并增加LC3Ⅱ的表达,同时阻止hsBAFF诱导Akt、S6K1磷酸化；下调LC3Ⅰ/Ⅱ强化Akt抑制剂X或雷帕霉素抑制hsBAFF促进B细胞增殖和存活：钝化Akt活性增强雷帕霉素或PP242阻滞hsBAFF抑制自噬促进B细胞增殖和存活；沉默mTOR也提高Akt抑制剂X或PP242阻滞hsBAFF抑制自噬促进B细胞增殖和存活。提示：hsBAFF通过激活Akt/mTOR信号通路抑制自噬促进B细胞增殖和存活。3 hsBAFF通过Ca2+-CaMKⅡ激活Akt/mTOR信号通路抑制自噬促进B细胞增殖和存活Raji细胞、或用shRNA GFP或shRNA CaMKⅡ感染的Raji细胞,分别用PP242(11μM)预处理2h, BAPTA/AM (20μM)、EGTA (100μM)、2-APB (100μM)、KN93(10μM)预处理1h后加入2.5μg/ml hsBAFF刺激12 h或48 h。之后,MTS和细胞计数评价细胞增殖与存活表现,Western blotting检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、Beclin1、 Akt、S6K1、CaMKⅡ等蛋白分子表达。结果显示：BAPTA/AM螯合细胞内Ca2_以及EGTA、2-APB减少细胞内Ca2+增加LC3Ⅱ表达,同时阻滞hsBAFF诱导Akt、S6K1磷酸化,而联合PP242预处理这些变化更明显,表明hsBAFF激活Akt/mTOR通路抑制自噬促进B细胞增殖和存活是Ca2+依赖的；BAPTA/AM、 EGTA、2-APB抑制hsBAFF诱导CaMKⅡ磷酸化；用KN93抑制CaMKⅡ显著增加LC3Ⅱ表达,并且降低hsBAFF诱导Akt、S6K1、CaMKⅡ磷酸化,而联合PP242预处理结果更显著；沉默CaMKⅡ增强PP242阻滞hsBAFF抑制自噬促进B细胞增殖和存活。提示：hsBAFF通过Ca2+-CaMKⅡ激活Akt/mTOR信号通路抑制自噬促进B细胞增殖和存活。