不同方法处理即刻种植骨缺损间隙的动物实验研究

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目的:探讨即刻种植较大范围(3-4mm)的骨缺损间隙在不植骨状态下的自身成骨能力及富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin, PRF)对骨缺损区成骨能力的影响。寻找出不植骨的适应范围,探讨即刻种植较大范围(3-4mm)的骨缺损间隙的最佳处理方式。提高即刻种植的成功率及安全可靠性,减轻病人的经济负担。方法:实验一:PRF的制取无菌操作条件下,经静脉采血5mL,置于无添加剂的无菌负压采血管中,3000rpm转速下离心15min。即可见管中血液样本分为3层,中间层淡黄色凝胶即为PRF凝胶。弃去PPP上清,用镊子取出PRF凝胶,并剪除底部红细胞碎片层,收集中间纤维蛋白凝胶层。用无菌纱布轻轻挤压出其内在的血清,即可制成PRF膜。实验二:即刻种植后骨缺损间隙区的四种不同的处理方法。健康雄性成年Beagle犬4只,适应性喂养2周。称重后,行全身麻醉。麻醉生效后,0.5%碘伏消毒口腔及术区黏膜,阿替卡因肾上腺素注射液进行局部浸润麻醉,常规铺无菌中。小心拔除犬双侧下颌P1、P2、P3、P4牙位。于远中根拔牙窝的远中距牙根间隔5-6mm处,以小球钻定位,扩孔钻逐级备孔,预备种植窝至深度8mm。生理盐水冲洗拔牙窝以去除残余骨屑,即刻植入直径3.6mm,长度8mm Super Line种植体。每个牙位远中根拔牙窝处植入的种植体均紧贴牙槽窝远中骨壁及颊舌骨壁,植入扭矩约35N.cm,种植体获得初始固位,不松动。植入种植体后保证沿下颌骨长轴向骨缺损范围达3-4mm。骨缺损间隙处的处理方法分别为:A:植入Bio-oss骨粉并覆盖胶原膜;B:不植入骨粉单纯覆盖胶原膜;C:单纯覆盖PRF膜;D:单纯填入PRF凝胶。采用埋入式种植,安装覆盖螺丝,分层严密缝合。分别于术后1个月和3个月处死动物,制取标本,观测以下指标:(1)大体标本并拍摄X线片,观察犬种植体与周围骨组织是否存在间隙;种植体周围骨的密度及骨质吸收情况。(2)HE染色切片光镜下观察种植体周围骨组织的形态学变化,并对骨细胞进行计数。(3)硬组织切片观察种植体周围组织形态学改变,并通过定量组织学分析,获得新骨生成率(Bone Ingrowth Fraction, BIF)及骨性结合率(contact length fraction, CLF)。运用统计软件SPSS13.0对实验数据进行统计学分析,以p<0.05为有显著差异性。结果:1、大体标本观察:4只实验用犬术区软组织愈合良好,形态颜色正常,无红肿、破溃、溢脓等炎性反应发生。种植体与骨愈合良好,无松动脱落,各组骨缺损区已被新生骨充填,实验A组可见未降解的部分骨粉颗粒残留。2、X线观察:各时间段种植体与骨组织间均无明显间隙,种植体颈部骨质未见明显的吸收影像,各处理组间骨密度未见明显区别。3、CBCT骨密度分析:不同时间段内各组骨缺损区新生骨骨密度与原骨骨密度差值的差异无统计学意义(P>0.05)4、形态组织学观察(1)1个月A组:未完全吸收的骨粉颗粒周围见骨小梁结构。(2)1个月B组:骨缺损区上半部为结缔组织,下半部新生骨小梁散在。(3)1个月C组:结缔组织较之1个月B组明显减少。大量新生骨小梁散在分布,新骨中可见大量骨细胞位于骨基质中。(4)1个月D组:与1个月C组无明显区别。骨小梁边缘成骨细胞活跃。(5)3个月A组:镜下观察未见明显骨粉颗粒,缺损区完全被新骨充填。新骨中可见明显的哈弗系统。(6)3个月B组:可见不同骨改建时期的骨结构界限明显。骨单位明显。(7)3个月C组:缺损区完全被新骨充填,与原骨组织融合,界限不明显。(8)3个月D组:新生骨组织与原骨组织开始融合,骨改建过程明显。5、定量组织学分析(1)在相同时间段内骨缺损区不同的处理方法对CLF及BIF的影响无明显差别(P<0.05)。且CLF及BIF与骨缺损区的处理方法、拔牙位点、时间三种因素之间无线性关系。(2)在相同时间段内骨缺损区不同的处理方法对骨细胞数量的影响无明显差别(P<0.05)。但骨细胞数量与时间因素之间有线性关系(P>0.05)。结论:(1)在即刻种植较大范围(3-4mm)骨缺损区,不植入骨粉而单纯覆盖胶原膜的处理方法可以获得良好的骨结合。(2)新一代血小板浓缩制品PRF具有良好的引导骨再生作用,促进即刻种植种植体形成骨结合。在即刻种植较大范围(3-4mm)骨缺损区,填入PRF可获得良好的成骨效果。(3)PRF呈膜形态还是凝胶形态对骨结合的影响无明显区别。
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