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目的：用RNA干扰技术沉默卵巢癌紫杉醇耐药株中表达上调的Prohibitin(PHB)基因,通过MTT和流式细胞术分析沉默目的基因后靶细胞(卵巢癌紫杉醇耐药细胞系SKOV3/Taxol-25)的细胞增殖与凋亡情况,阐明PHB为卵巢癌紫杉醇耐药相关蛋白,为逆转卵巢癌紫杉醇耐药提供理论和实验基础。方法：1.在前期研究基础上(采用蛋白质组学技术比较卵巢癌紫杉醇耐药细胞系(SKOV3/Taxol-25)和敏感细胞系(SKOV3)的蛋白质表达的差异,发现PHB蛋白在SKOV3/Taxol-25中表达明显上调,提示PHB高表达可能与卵巢癌紫杉醇耐药有关),采用Western blot及Real Time-PCR方法验证SKOV3/Taxol-25细胞株及SKOV3细胞株中PHB蛋白与mRNA的表达差异。2.应用RNA干扰技术沉默PHB基因：以脂质体Lipofectamine2000为载体,将针对靶基因PHB设计的带有荧光蛋白的三个特异性小发夹RNA干扰片段pshRNA/PHB427(实验组PHB1)、 pshRNA/PHB248(实验组PHB2)、pshRNA/PHB136(实验组PHB3)及pshRNA/NC(空载质粒)瞬时转染于卵巢癌紫杉醇耐药细胞株(SKOV3/Taxol-25)。3.在荧光显微镜下定时观察细胞荧光表达情况,在转染48小时后,采用、Nestern blot及Real Time-PCR检测PHB蛋白与mRNA水平的表达情况以了解沉默效果,并筛选出沉默效果较明显的两个片段分别为实验组,与阴性对照组进行后续实验比较。4.通过MTT实验检测两组细胞的增殖能力、流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果：1.PHB蛋白与mRNA在SKOV3/Taxol-25及SKOV3细胞株中差异表达：Western-blot结果显示PHB蛋白在SKOV3/Taxol-25细胞株中表达高于SKOV3细胞株,差异有统计学意义(p<0.05); Real Time-PCR结果显示PHB mRNA在SKOV3/Taxol-25细胞株中的表达高于SKOV3细胞株,差异有统计学意义(p<0.05)。2.成功干扰各实验组细胞中PHB的表达：通过瞬时转染靶向pshRNA/PHB质粒于SKOV3/Taxol-25细胞株,转染后可见SKOV3/Taxol-25细胞株有绿色荧光表达,提示转染成功,在荧光显微镜下观察到转染48h后的靶细胞绿色荧光表达最强；Western-blot结果显示三组片段均能抑制PHB蛋白的表达,其中干扰48小时后的沉默效应最佳,以片段pshRNA/PHB427(实验组PHB1)、 pshRNA/PHB136(实验组PHB3)干扰效果更好,两实验组蛋白相对表达量分别为(0.652±0.224)%、(0.598±0.026)%,与阴性对照组(pshRNA/NC)的(0.84±0.039)%相比较,差异有统计学意义(p<0.05),而pshRNA/PHB427(实验组PHB1)、pshRNA/PHB248(实验组PHB2)及pshRNA/PHB136(实验组PHB3)各实验组之间进行两两比较,差异无统计学意义(p>0.05),选择干扰效应较好的片段pshRNA/PHB427(实验组PHB1)及pshRNA/PHB136(实验组PHB3)进行后续实验；Real Time-PCR结果显示：将片段pshRNA/PHB427(实验组PHB1)、pshRNA/PHB136(实验组PHB3)分别转染目的细胞干扰48h后,实验组PHB1(pshRNA/PHB427)、实验组PHB3(pshRNA/PHB136)与阴性对照组(pshRNA/NC)的(2-△△Ct)之间进行比较,各实验组的PHB mRNA(?)目对表达量较阴性对照组有明显下降,差异有统计学意义(p<0.05),而实验组PHB1(pshRNA/PHB427)与实验组PHB3(pshRNA/PHB136)之间进行比较,差异无统计学意义(p>0.05)。3.PHB对细胞增殖及凋亡能力的影响：分别在干扰后0h、24h、48h、72h及96h后进行MTT法检测SKOV3/Taxol-25细胞株的增殖能力变化,结果显示实验组PHB1(pshRNA/PHB427)及实验组PHB3(pshRNA/PHB136)的细胞增殖明显减慢,且差异有统计学意义(p<0.05)；流式细胞术检测发现,在RNA干扰沉默SKOV3/Taxol-25细胞株中PHB基因后,各实验组的凋亡细胞明显增加,同阴性对照组比较有统计学意义(p<0.05),实验组PHB1(pshRNA/PHB427)与实验组PHB3(pshRNA/PHB136)之间的凋亡率进行比较,差异无统计学意义(p>0.05)。结论：针对PHB合成的shRNA能够有效地抑制卵巢癌紫杉醇耐药细胞株(SKOVS/Taxol-25)中PHB基因在蛋白和mRNA水平的表达,沉默后的SKOVS/Taxol-25细胞株的细胞增殖能力下降、细胞凋亡增加,提示PHB与卵巢癌紫杉醇耐药产生相关；干扰PHB的表达可能降低卵巢癌紫杉醇耐药性。