超声辐照载羟基喜树碱微泡对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

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目的:研究超声辐照载羟基喜树碱微泡对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖抑制作用。方法:将SMMC-7721细胞随机分为6组,即Ⅰ对照组、Ⅱ空白脂质微泡+超声组、Ⅲ载羟基喜树碱微泡组、Ⅳ羟基喜树碱组、Ⅴ羟基喜树碱+超声组、Ⅵ载羟基喜树碱微泡+超声组。(1)采用MTT法观察各处理因素对细胞的生长抑制情况;(2)采用流式细胞仪(Flow cytometry ,FCM)分析各处理因素对细胞周期分布的影响;(3)采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组SMMC-7721细胞的早期凋亡状况;(4)采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测各组SMMC-7721细胞的中晚期凋亡状况;(5)采用免疫细胞化学法检测各组细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果:(1)各处理因素均可抑制SMMC-7721细胞增殖并且抑制作用呈时间依赖性,其中载羟基喜树碱微泡+超声组对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用最为显著,其24h、48h、72h的抑制率分别为(49.56±1.57)%,(80.01±1.52)%,(91.41±0.64)%,与其它各处理组相比差异具有显著性意义( P <0.05)。(2)FCM结果显示载羟基喜树碱微泡组、羟基喜树碱组、羟基喜树碱+超声组和载羟基喜树碱微泡+超声组处理细胞24 h后使细胞周期分布发生变化,主要表现为G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,其中载羟基喜树碱微泡+超声组使G0/G1期细胞比例增加最为显著( P <0.05)。空白脂质微泡+超声组处理后细胞周期变化主要为G2/M期细胞比例增加。(3)Annexin V-FITC/PI检测各组细胞早期凋亡率为:对照组(2.58±0.20)%、空白脂质微泡+超声组(4.57±0.59)%、载羟基喜树碱微泡组(4.60±0.86)%、羟基喜树碱组(6.21±0.87)%、羟基喜树碱+超声组(8.22±1.03)%、载羟基喜树碱微泡+超声组(12.18±1.38)%。载羟基喜树碱微泡+超声组与其他各组间的差异具有显著性意义( P <0.05)。(4)TUNEL法检测各组细胞中晚期凋亡率为:对照组(2.32±1.00)%、空白脂质微泡+超声组(6.57±1.76)%、载羟基喜树碱微泡组(7.90±1.06)%、羟基喜树碱组(16.44±0.65)%、羟基喜树碱+超声组(23.64±0.63)%、载羟基喜树碱微泡+超声组(34.25±1.83)%。载羟基喜树碱微泡+超声组与其他各组间的差异具有显著性意义( P <0.05)。(5)免疫细胞化学法检测五种处理因素均对SMMC-7721细胞的Bcl-2和Bax蛋白表达有影响,其中载羟基喜树碱微泡+超声组的Bcl-2和Bax变化最为显著,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax的比值明显下降,与其他各组间的差异具有显著性意义( P <0.05)。结论:超声辐照载羟基喜树碱微泡能明显抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,其抑制作用可能与有效阻滞细胞周期于G0/G1期同时降低Bcl- 2/Bax比值诱导细胞凋亡有关。
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