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目的: 现今肺癌已经成为威胁人类生命健康的“超级杀手”,非小细胞肺癌约占其总数的80%~85%,五年存活率更是低于5%。自古以来,传统中医药各方大家对于恶性肿瘤的治疗总结出诸多方法,清热燥湿即为其中一种。本课题前期高通量筛选出一种抗非小细胞肺癌的中药有效成分---臭椿酮,其提取自具有清热燥湿功效的传统中药臭椿皮。臭椿酮对人鼻咽癌与淋巴细胞白血病有一定的细胞毒性,而与肺癌相关研究却不多。据此,我们进行动物及体外实验,较为系统地探研臭椿酮抗非小细胞肺癌的作用。 方法: 为了了解臭椿酮对非小细胞肺癌的抑制作用,我们利用MTT法检测臭椿酮不同浓度对非小细胞肺癌细胞株H1975,H1299和A549的增殖抑制作用;采用平板克隆试验检测臭椿酮不同浓度对三种细胞的成瘤性影响;采用划痕对A549,H1299和H1975爬行能力的影响;采用Transwell观察臭椿酮对上述三种细胞侵袭转移能力的干预作用。体内:采用Balb/c裸鼠H1975细胞皮下移植瘤模型,将小鼠分为臭椿酮组及对照组,3天一次臭椿酮腹腔注射给药,观察各组肿瘤生长状况,并测量肿瘤大小,观察生存期,以探讨臭椿酮在体内对其是否产生抑瘤效应。机制研究:利用流式细胞术检测臭椿酮对H1299,A549和H1975细胞周期的影响,以及臭椿酮对细胞凋亡的干预作用;Western blot检测不同臭椿酮药物处理后细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达情况; 结果: 实验结果:(1) MTT实验:臭椿酮能够诱导非小细胞肺癌的增殖抑制,并呈剂量和时间依赖性。(2)平板克隆:臭椿酮组长出的克隆明显比对照组(不用臭椿酮处理)少,其浓度在0.3125uM时见到较少的克隆生长(P<0.01),结果表明臭椿酮能明显抑制三种细胞增殖。(3)划痕实验:臭椿酮对A549、H1299和H1975的爬行能力有显著的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。(4) Transwell实验:臭椿酮可明显抑制A549,H1299和H1975细胞穿膜个数,臭椿酮显著降低非小细胞肺癌细胞的侵袭能力,且呈剂量依赖性。(5) H1975移植瘤模型:臭椿酮组明显抑制H1975抑制瘤的生长并延长生存期,具有统计学意义。(6)细胞周期:臭椿酮不同浓度处理后的A549,H1299和H1975细胞中细胞周期各期的分布比例并未发生明显的变化。(7)细胞凋亡:A549,H1299和H1975细胞细胞在臭椿酮干预后,用AnnexinⅤ-FITC及PI染色,A549结果并未显示出明显的凋亡或坏死,H1299晚期凋亡比例有增加趋势,但是无统计学意义,臭椿酮诱导H1975发生早期凋亡并呈剂量依赖性。(8)臭椿酮用药处理H1975以后caspase3及其下游死亡底物PARP发生剪切;而A549和H1299并没有激活这两个蛋白。 结论: 研究发现:(1)臭椿酮对NSCLC细胞A549、H1299、H1975具有不同程度的抑瘤作用并且可以抑制这三种细胞细胞克隆的形成;(2)臭椿酮能够显著抑制NSCLC的迁移及侵袭转移水平;(3)臭椿酮能够抑制H1975移植瘤的生长,延长生存期;(4)臭椿酮对NSCLC并无明显细胞周期阻滞的影响;(5)臭椿酮可以诱导H1975发生早期凋亡,对A549和H1299并无明显作用。(6)臭椿酮通过激活caspase依赖性信号通路诱导H1975细胞凋亡。综上,这些结果显示臭椿酮可多角度抑制NSCLC。阐明臭椿酮可能成为一种新颖的抗肿瘤药物,以及一种潜在治疗NSCLC的天然产物。