论文部分内容阅读
狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.属于伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum L.)植物。2010年《中华人民共和国药典》(第一部)中收录其干燥的根为入药部位,其主要有效成分为柴胡皂苷类化合物,现代药理学研究表明狭叶柴胡具有解热、抗病原微生物、抗炎、抗肿瘤及促进免疫功能的作用。本文对六株内生真菌CHS2、CHS3、CHS4、CHS5、CHL2、CHR4的代谢产物进行了LC-MS分析,结果表明:该六株菌均能产生与宿主相同的成分,其中CHS2和CHS3能产生柴胡皂苷d。体外抗乳腺癌MCF-7细胞、胃癌SGC-7901细胞、肝癌HepG-2细胞的研究,结果表明:同一菌株发酵液的乙醇粗提物对不同肿瘤细胞的抑制效果不同,不同菌株发酵液的乙醇粗提物对同一肿瘤细胞的抑制效果也不同。其中,内生真菌CHS4、CHR4、CHS5的代谢产物的乙醇粗提物对肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MCF-7、胃癌细胞SGC-7901的IC50值分别为75.11ug/mL,87.17ug/mL和88.38ug/mLa经ITS分子鉴定结果表明:CHS2、CHS3、CHS4、CHS5、CHL2、CHR4分别属于镰刀孢属Fusarium oxysporum、镰刀孢属Fusarium acuminatum、链格孢属Alternaria alternata、曲霉属Aspergillus versicolor、青霉属Penicillium sanguifluum及青霉属Penicillium cordubense。对肝癌具有较强抑制活性的CHS4和CHS5进行了体外抗肝癌活性有效部位的筛选,结果表明:菌CHS5的正丁醇有效部位粗提物对人肝癌细胞HepG-2表现出较高活性,其IC50值为14.53ug/mL;菌CHS4的石油醚有效部位粗提物对人肝癌细胞HepG-2表现出较高活性,其IC50值为20.06ug/mLo本文对狭叶柴胡悬浮细胞的发酵条件进行了优化,优化结果为:狭叶柴胡愈伤组织初始接种量为2.0g、培养体积为100mL(250mL (?)住形瓶)、MS液体培养基附加6-BA2.5mg/L.2,4-D0.1mg/L及KT0.9mgL;外源添加物水解酪蛋白、水杨酸、茉莉酸甲酯的最佳使用浓度分别是250mg/L、16mg/L及22.5mg/L。经LC-MS分析表明:在愈伤组织、悬浮细胞及细胞发酵液中均检测到了柴胡皂苷d。本文对狭叶柴胡愈伤组织及悬浮细胞的代谢产物的不同有效部位进行了体外抗乳腺癌MCF-7细胞、肝癌HepG2细胞及胃癌SGC-7901细胞的筛选,结果表明:愈伤组织的乙酸乙酯有效部位对乳腺癌MCF-7细胞及胃癌SGC-7901细胞表现出最强抑制活性,其中IC50值分别为26.06ug/mL和31.45ug/mL:;悬浮细胞的乙酸乙酯有效部位对乳腺癌MCF-7细胞及胃癌SGC-7901细胞表现出最强抑制活性,其中IC50值分别为18.21ug/mL和32.43ug/mL;愈伤组织及悬浮细胞的正丁醇有效部位对肝癌HepG2细胞表现出最强抑制活性,其中IC50值分别为17.77ug/mL和30.06ug/mL。