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非苯二氮卓类药物是作用于中枢神经系统的抑制剂,属于第三代镇静催眠药。该类药物具有入睡速度快,促进深度睡眠,醒后无宿醉感等特点,因此自二十世纪八十年代后期问世以来,受到广泛关注。该类药物的代表性药物有唑吡坦、佐匹克隆和扎来普隆。其中扎来普隆是临床治疗最常用的药物,也是应用最广泛的药物。但与此同时,相关文献报道,有不法分子利用该类药物实施麻醉抢劫、迷奸、毒驾等。目前,还未见同时检验扎来普隆及其代谢产物的报道。因此,建立生物样品中扎来普隆及其两种代谢产物5-氧扎来普隆和脱乙基扎来普隆的快速、简便、高灵敏度的分析方法具有十分重要的意义。本文对生物样品中扎来普隆及其代谢产物5-氧扎来普隆和脱乙基扎来普隆的检验方法进行了研究:1.建立了检测扎来普隆及其两种代谢产物的超高效液相色谱-串联质谱方法;2.建立了全血中扎来普隆及其两种代谢产物的沉淀蛋白和QuEChERS提取净化方法;3.建立了尿液中扎来普隆及其两种代谢产物沉淀蛋白和固相萃取提取净化方法;4.建立动物实验模型,分析了扎来普隆中毒标记物在大鼠体内代谢规律。实验结果:1.选用Waters ACQUITY UPLC?BEH C18(2.1 mm×150mm,1.7μm)色谱柱;0.1%甲酸水(A相)和0.1%甲酸-乙腈(B相)作为流动相;采用梯度洗脱程序;采用ESI+,多反应监测(MRM)扫描模式;选取扎来普隆母离子m/z 306.1,定性离子m/z264.4和m/z 236.0,定量离子m/z 236.0,选取5-氧扎来普隆母离子m/z 322.2,定性离子m/z 252.2和m/z 280.2,定量离子m/z 280.2,选取脱乙基扎来普隆母离子m/z 278.2,定性离子m/z 236.4和m/z 260.3,定量离子m/z 260.3。扎来普隆、5-氧扎来普隆和脱乙基扎来普隆的最低检测限分别为0.01ng/mL、0.05ng/mL和0.02ng/mL,最低定量限分别为0.05ng/mL、0.5ng/mL和0.1ng/mL。该方法在0.5~100ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r2达0.999以上。2.全血中扎来普隆及其代谢产物采用QuEChERS方法进行前处理,扎来普隆及其代谢产物的基质效应系数在84.6%~104.6%,绝对回收率在92.0%~100.1%。此方法在0.5~100ng/mL范围内有良好的线性关系,日内精密度以及日间精密度RSD≤10.3%。3.尿液中扎来普隆及其代谢产物采用固相萃取方法进行前处理,扎来普隆及其代谢产物的基质效应系数在90.3%~100.6%,绝对回收率在88.0%~95.8%。此方法在0.5~100ng/mL范围有良好的线性关系,日内精密度以及日间精密度RSD≤10.4%。4.建立大鼠动物实验模型。SD大鼠12只,雌性,体重200g±10%,以灌胃方式给药,按设定系列时间点对大鼠剪尾取血。将大鼠置于代谢笼中自然留尿并及时收集,每次尿准确称重,连续取8日。经过对大鼠血、尿液中扎来普隆及其代谢产物含量检测,得出检验时间窗长度排序为:尿液中5-氧扎来普隆>尿液中扎来普隆>尿液中脱乙基扎来普隆>血中脱乙基扎来普隆>血中扎来普隆>血中5-氧扎来普隆。这一代谢规律对于法庭科学采取检材和提高检验鉴定效率有着重要指导意义。