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皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）具有个头大、产量高、营养丰富等特点,被誉为海产品中的“海珍之冠”。近年来,我国鲍鱼产量逐年递增,但在养殖过程中发现种鲍性腺发育不均衡,对后续的苗种繁育与养殖产生不利影响。本文的主要研究内容如下:通过前期构建的转录组文库和同源序列得到基因序列之后,再进行生物信息学分析,然后通过荧光定量对WNT4、β-catenin和DAX1基因在雌雄皱纹盘鲍不同月份不同组织中的表达模式进行分析,最后通过原位杂交技术对WNT4、β-catenin和DAX1基因在雌雄皱纹盘鲍不同月份性腺中的表达进行定位分析。研究结果为深入了解皱纹盘鲍性腺的发育机制和探究性腺发育相关基因的功能及调控机理提供基础数据。主要研究结果如下:1皱纹盘鲍WNT4基因生物信息学分析及与性腺发育相关性的研究WNT4作为WNT基因家族的重要成员,在动物的性腺发育过程中起重要调控作用。本研究从皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）转录组文库中获得WNT4基因的c DNA序列,该序列长2002 bp,包括5’非编码区（5’UTR）342 bp,3’非编码区（3’UTR）595 bp,开放阅读框（ORF）长度为1071 bp,可以编码356个氨基酸。该蛋白序列与福寿螺（Pomacea canaliculata）、长牡蛎（Crassostrea gigas）、栉孔扇贝（Azumapecten farreri）和厚壳贻贝（Mytilus coruscus）的同源性分别为71.86%、70.92%、67.51%和65.32%。通过q RT-PCR分析WNT4基因在雌雄皱纹盘鲍不同月份不同组织中的表达特点,其结果显示,除肝胰腺外,WNT4基因在其雌雄个体不同月份的鳃、外套膜、肌肉和性腺中均有表达;在雌性个体性腺中,WNT4基因的表达量以7月份为最高,显著高于其他月份;其次为5、8月,显著高于6、9月的表达量;5月与8月、6月与9月之间均差异不显著。在雄性个体性腺中,不同月份WNT4的表达量7月＞8月＞9月＞5月＞6月;7、8月的表达量均显著高于其他月份,9月显著高于6月的表达量,与5月差异不显著,5月表达量与6月差异不显著。此外,WNT4基因在精巢的表达量均高于卵巢。原位杂交（ISH）结果显示,WNT4在5—9月雌性皱纹盘鲍性腺的卵母细胞和雄性性腺的结缔组织均有明显的蓝紫色杂交信号。皱纹盘鲍WNT4基因在各个组织均有表达,表明其的表达特点是广泛性的,参与多种组织细胞的生命过程;在不同月份性腺中的表达特征,推测其可能在两性性腺发育过程中发挥作用。2皱纹盘鲍β-catenin基因生物信息学分析及与性腺发育相关性的研究β-连环蛋白是连环蛋白家族中的一员,在动物的性腺发育过程中起重要调控作用。本研究通过RACE技术得到β-catenin的c DNA全长序列,该序列长3083 bp,包括5’UTR长为100 bp,3’UTR长为1219 bp,其中ORF长为1761bp。该序列与福寿螺（P.canaliculata）、大西洋舟螺（C.fornicata）、海蜗牛（A.californic）、合浦珠母贝（P.fucata）和长牡蛎（C.gigas）的同源性分别为90.47%、89.70%、87.91%、86.97%和85.50%。通过q RT-PCR技术分析,结果显示,除肝胰腺外,其雌雄个体在不同月份的外套膜、肌肉、性腺和鳃中均有表达;在雌性个体性腺中,7月β-catenin基因的表达量最高;其次为5、6月,显著高于8、9月的表达量;5月与6月、8月与9月之间均差异不显著。在雄性个体性腺中,β-catenin基因的表达量由低到高的顺序为5、6、8、9、7月。此外,β-catenin基因在卵巢的表达量均高于精巢。原位杂交结果显示,雌性不同月份性腺中均存在明显的蓝紫色杂交信号,主要位于卵母细胞和体细胞中;在雄性5、6、7、8月份性腺中也存在蓝紫色杂交信号,主要位于结缔组织和精母细胞上,而在九月份性腺中未检测到蓝紫色信号。雌雄性腺均为7月份杂交信号最强,对照组中均无信号。3皱纹盘鲍DAX1基因生物信息学分析及与性腺发育相关性的研究DAX1是一种孤寡蛋白,是核受体超家族中的重要一员。本研究从皱纹盘鲍转录组文库中获得DAX1基因的c DNA序列,该序列长2835 bp,包括5’UTR长为54 bp,3’UTR长为1705 bp,其中ORF为1077bp。该蛋白序列与海蜗牛（A.californic）、栉孔扇贝（A.farreri）等物种的同源性都在50%以上。通过q RT-PCR分析,结果显示,除肝胰腺外,其雌雄个体在不同月份的外套膜、肌肉、性腺和鳃中均有表达;在雌性个体性腺中,7月DAX1基因的表达量最高,其次为5、6、8月。在雄性个体性腺中,DAX1基因的表达量由低到高依次为9、8、6、5、7月份,7月份的表达量显著高于其他月份。原位杂交（ISH）结果显示,雌性不同月份性腺中均存在明显的蓝紫色杂交信号,主要位于卵母细胞和卵原细胞中;在雄性5、6、7月份的性腺中也存在蓝紫色杂交信号,主要位于精母细胞和结缔组织上,但信号较弱,在8、9月份的性腺中未检测到蓝紫色杂交信号。雌性性腺杂交信号强于雄性性腺,对照组中均无信号。