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目的:评价肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae, Cpn)假定III型分泌系统(Type III secretion system, T3SS )效应蛋白Cpn0423和Cpn0710的免疫活性;检测其在Cpn感染的人喉癌上皮细胞(Hep-2)中的定位情况;观察Cpn0423和Cpn0710蛋白的表达时相,为寻找新的Cpn和宿主细胞相互作用的关键效应蛋白奠定基础。方法:提取重组质粒pGEX6p-2/Cpn0423和pGEX6p-2/Cpn0710,并转化至表达菌E.coli BL21中,IPTG诱导表达重组蛋白Cpn0423和Cpn0710,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western-Blot)分析和鉴定表达产物;采用GST纯化树脂纯化重组蛋白,并浓缩纯化蛋白,BCA法测定蛋白浓度;重组蛋白皮下注射免疫BALB/c小鼠,制备Cpn0423、Cpn0710多克隆抗体,ELISA法检测免疫小鼠血清中多克隆抗体的效价,分析重组蛋白的免疫原性;间接免疫荧光法(Indirect Immunofluorescence Assay, IFA)检测Cpn0423和Cpn0710蛋白在Cpn感染Hep-2细胞72h后的定位情况。同时应用IFA观察Cpn0423和Cpn0710蛋白在Cpn感染细胞6h, 12h, 24h, 36h, 48h, 72h, 96h, 120h后不同时间点表达量的变化及Cpn包涵体形态学上的变化特征。结果:Cpn0423和Cpn0710重组蛋白在E.coli BL21菌中获得高效表达,Mr分别约为41kDa和35kDa,对温度、IPTG和时间等诱导表达条件进行系列的摸索优化后,获得可溶性表达蛋白;采用GST纯化树脂纯化获得纯度在95%以上的重组蛋白;重组蛋白免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测免疫血清特异性抗体,效价分别为1:16000和1:12000。Cpn成功感染Hep-2细胞,应用IFA检测Cpn0423和Cpn0710蛋白定位在宿主细胞胞浆,观察了Cpn包涵体随时间在感染Cpn细胞中形态学上的变化。结论:(1)成功制备并纯化Cpn0423和Cpn0710重组蛋白;(2) Cpn0423和Cpn0710能刺激BALB/c小鼠产生高滴度的特异性抗体,具有较好的免疫原性;(3) Cpn0423和Cpn0710蛋白定位在宿主细胞胞浆,可能为Cpn分泌性蛋白。