实验一、兔卵母细胞为受体的异种克隆研究。 异种核移植是研究核质之间相互作用的一种有效手段，而且也是治疗性克隆和拯救濒危动物的一种方法。异种核移植研究一个很重要的问题是合适的卵母细胞受体的选择。在以往的异种核移植研究中，牛、绵羊和兔卵母细胞被广泛的用作受体。相比于牛卵母细胞和绵羊卵母细胞，兔卵母细胞具有更多的优势：兔是一种常用的实验动物，个体小，饲养方便。兔卵母细胞容易获得，超排一只兔大概可以得到30-40个卵母细胞。以前的研究表明兔卵母细胞可以使大熊猫、猕猴、鸡、猫和人的体细胞核重编程，并支持重构胚胎发育到囊胚。为了进一步研究兔卵母细胞重编程异种体细胞的能力，在本研究中以骆驼和藏羚羊体细胞作为供体，研究了异种重构胚胎的发育能力。首先用四种不同的活化方式对兔卵母细胞进行孤雌激活研究，以确定重构胚胎的最佳活化方案。结果表明Pulese+6-DMAP方案活化的兔卵母细胞有最高的囊胚发育率。异种克隆胚胎的活化也同样使用Pulese+6-DMAP方案。血清饥饿和未血清饥饿的体细胞分别用作核供体，结果表明重构胚的融合率和体外发育率均没有显著差异，血清饥饿并不是必须的。本实验中使用M199+10％FCS，SOF和mCR1aa三种培养液对重构胚胎进行培养。骆驼-兔重构胚在M199+10％FCS和SOF中的囊胚率分别是7.5％和6.0％，而在mCR1aa中培养没有得到囊胚。藏羚羊-兔重构胚在M199+10％FCS，SOF和mCR1aa中的囊胚率分别是8.7％，7.8％和1.4％。两种异种重构胚胎在M199+10％FCS和SOF中的囊胚率没有显著差异，但是均显著高于在mCR1aa中的囊胚率。研究表明：兔卵母细胞能够使骆驼和藏羚羊体细胞核重编程，并能够支持重构胚在体外发育到囊胚。调节早期胚胎发育的机制在哺乳动物中可能是保守的，哺乳动物卵母细胞质中存在的重编程体细胞核的因子并不是物种特异性的。 实验二、山羊卵母细胞为受体的异种克隆藏羚羊研究。 藏羚羊(Pantholopshodgsoni)属牛科，藏羚属，是国家一级保护动物。自1997年第一只体细胞克隆绵羊“多莉”诞生以来，体细胞克隆技术已经在11个物种取得成功，异种克隆也在野牛和欧洲盘羊取得成功。由于克隆是一种无性繁殖方式，不需要雌雄配子的结合，只要有供体细胞和受体卵母细胞就可以进行克隆，并且克隆后代的性状与供体细胞一致。因此克隆技术尤其是异种克隆技术在保护濒危动物方面的潜力引起了人们的关注。目前，还没有见到有关藏羚羊克隆研究的报道。本研究中用山羊卵母细胞作受体研究了异种克隆藏羚羊的可能性。研究了培养体系、去核时机和供体细胞代数对藏羚羊-山羊胚胎体外发育的影响。重构胚分别在mCR1aa微滴中培养和在含贴壁C57BL/6鼠胎儿成纤维细胞的mCR1aa微滴中进行共培养。共培养的胚胎有4.0％能发育到囊胚，单独培养在mCR1aa中没有发育到囊胚。以末期(TII)去核山羊卵母细胞为受体构建的胚胎其融合率和囊胚率均略高于以中期(MII)去核山羊卵母细胞为受体构建的胚胎(3.9％vs67.4％and4.0％vs1.1％)。3-8代藏羚羊细胞作为供体时，2.9％的藏羚羊-山羊胚胎可以发育到囊胚，10-17代细胞作供体时，藏羚羊-山羊胚胎没有发育到囊胚，表明长期培养使供体细胞的融合能力和发育能力都有所下降。总共2397个2-4细胞时期的藏羚羊-山羊胚胎移植到66只受体山羊的输卵管中。但都没有发育到期。研究表明：山羊卵母细胞能重编程来自异属的藏羚羊体细胞核，并支持重构胚发育至囊胚。