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猪圆环病毒(PCV)可分为猪圆环病毒Ⅰ型(PCV 1)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV 2)。目前认为PCV 1不具有致病性,PCV 2是猪圆环病毒病的主要病原。PCV 2基因具有11个主要阅读框,其中ORF2阅读框编码的Cap蛋白表面具有很多PCV 2抗原表位和识别位点,所以Cap蛋白可以作为猪圆环病毒(PCV 2)的理想抗原。Cap蛋白可以作为猪圆环病毒(PCV2)抗原的优点主要有以下几点:1.成分已知固定、安全可靠、无毒、无副作用;2.蛋白含量可控,各批次间产品质量统一。但是近年来的研究表明PCV 2 Cap蛋白主要以包涵体的形式表达,要想获得可溶性的PCV 2 Cap蛋白并不容易。虽然有研究可以使以包涵体形式表达的PCV 2 Cap蛋白经过变性和复性的处理后可以获得可溶性蛋白。但此过程过于复杂,并且变性和复性的过程可能会对蛋白本身产生影响。因此获得可溶性的PCV 2 Cap蛋白无论是对于疫苗研制还是科学研究都是极其重要的。本试验通过构建原核表达重组载体pET21b-MBP/EDA/GST/γ-crystallin-PCV2获得可溶性重组PCV 2 Cap蛋白。PCV 2 Cap蛋白研究中发现该蛋白具有识别和切开天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸一个小肽的切割活性。1:构建重组载体pET21b-MBP/EDA/GST/γ-crystallin-PCV2。PCV 2基因经PCR获得后与具有相同酶切位点的4个载体pET28-EDA/γ-crystallin/GST/MBP构建出重组蛋白EDA/γ-crystallin/GST(Glutathione-S-transferase)即谷胱甘肽转移酶/MBP(Maltose-binding protein)-PCV 2表达载体。研究中我们获得了可溶性良好的重组EDA/GST/MBP-Cap蛋白,EDA/GST-Cap蛋白可溶性蛋白分别占总目的蛋白的76.9%和30.7%。通过SDS-PAGE胶分析和Western blot鉴定,证明重组质粒在大肠杆菌均可以表达可溶性农壳蛋白并且具有良好抗原性。2:PCV 2 Cap蛋白酶活性的探索。试验中我们发现PCV 2 Cap蛋白具有识别和切开天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸一个小肽的功能。为了进一步验证Cap蛋白酶活的功能,研究中我们把载体pET21b-SpyTag-sf-GFP-SpyCatcher基因sf-GFP和SpyCatcher连接点发生突变使之可以翻译蛋白天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸小肽。然后用取得的可溶性PCV 2 Cap蛋白与突变的SpyTag-sf-GFP-SpyCatcher蛋白反应。SDS-PAGE胶再次验证PCV 2 Cap蛋白酶可以识别并切开天冬氨酸、组氨酸、缬氨酸一个小肽的功能。研究中在可溶性Cap蛋白与突变的SpyTag-sf-GFP-SpyCatcher蛋白反应中加入抑制剂初步估测PCV 2 Cap蛋白属于哪类酶。运用软件分析PCV 2 Cap蛋白二级结构突变PCV2基因碱基找到PCV 2 Cap蛋白活性中心。本研究为PCV 2 PCV 2 Cap蛋白的功能研究、猪圆环病毒的感染机制和亚单位疫苗的研制提供基础。