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Wnt10b基因作为"第一表皮信号"候选基因,对毛囊生长发育和周期性循环生长具有重要意义。研究发现,Wnt10b基因在小鼠毛囊形成和毛囊生长期初期有表达量显著上调的趋势,Wnt10b蛋白在体外培养的胚胎表皮中通过经典的Wnt通路,诱导未成熟的表皮细胞向毛干及内根鞘细胞分化。Wnt10b基因作为改善羊毛品质的重要候选基因,具有巨大研究价值。本研究主要进行以下方面工作:1)本研究首次延长绵羊KAP6.1启动子至1523bp,对绵羊KAP6.1启动子转录因子结合位点进行预测分析,并通过EMSA实验验证,表明本研究延长的KAP6.1启动子区域存在一个NF-kappa-B转录因子结合位点,有助于增强启动子转录活性。2)本研究首次克隆了绵羊完整的Wnt10b基因cDNA序列并首次发现一个可变剪接体Wnt10b-AS。利用荧光定量PCR检测Wnt10b基因和可变剪接体在绵羊心、肝、脾、肺、肾、皮肤、肌肉和脂肪组织中的表达。结果表明Wnt10b和Wnt10b-AS在检测组织中普遍表达。本研究构建Wnt10b-EGFP融合表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察Wnt10b蛋白在细胞内的表达。结果表明,绵羊Wnt10b蛋白属于分泌型蛋白,在细胞质中合成后分泌到细胞外,通过与细胞膜上受体结合发挥生物学作用。本研究发现的可变剪接体Wnt10b-AS可能以mRNA形式存在,并通过与主转录本不同机制高效调节Wnt通路活性。3)本研究构建KAP6.1-Wnt10b真核表达载体,通过原核注射方法得到5只原代Wnt10b转基因小鼠(F0代)。通过对F0代小鼠基因表达水平进行分析,66号家系小鼠皮肤组织中Wnt10b、frizzled和β-catenin基因高表达,差异显著(P<0.05)。利用皮肤组织冰冻切片分析毛囊形态和密度,结果表明66号家系F1代个体中,阳性个体毛囊由生长期进入静止期的时间相对阴性个体滞后;29和66号家系F1代个体中,同性别个体相比,阳性个体毛囊密度高于阴性个体,雌性个体高于雄性个体。4)本研究双酶切KAP6.1-Wnt10b表达载体,保留启动子和外源基因片段,通过原核注射方法制备转基因羊。对18只美利奴供体进行超数排卵,共得到胚胎177枚,其中可用胚胎166枚;共得到活羔21只,2只阳性羔羊。W002个体在羊毛长度、细度和毛囊密度上优于半同胞阴性个体;W003个体在羊毛长度、强度和伸长率上具有明显优势。Wnt10b和β-catenin基因可作为改良羊毛长度、细度的重要候选基因。