论文部分内容阅读
本文主要分为以下几个部分: 第一部分:阿法替尼与MEK抑制剂GSK1120212联合应用于腺癌细胞株NCI-H522和A549 目的: 探索阿法替尼与MEK抑制剂GSK1120212联合应用对肺腺癌细胞相关蛋白表达、细胞增殖和凋亡的作用。 方法: 1.细胞功能实验，于普通培养皿培养NCI-H522和A549细胞株，分别分为三组:单药阿法替尼组、单药GSK1120212组和联合用药组，每组内又接受4种不同的处理。单药阿法替尼组细胞分别用0（即对照组），2.5，5.0，10μMol/L终浓度的阿法替尼处理，单药GSK1120212组细胞分别用0，1.0，2.0，4.0μMol/L终浓度的GSK1120212处理，联合用药组分别用DMSO，5.0μMol/L阿法替尼，2.0μMol/L GSK1120212，5.0μMol/L阿法替尼+2.0μMol/L GSK1120212处理。培养24小时后收集细胞获取蛋白，western blot技术检测p-EGFR、p-AKT、p-S6、p-ERK1/2等蛋白的表达情况。 2.细胞增殖实验，用96孔板培养细胞，分3种处理，2组单药处理按0，0.125，0.25，0.5，1.0，2.0μMol/L终浓度进行药物处理，联合用药组采用1∶1联合用药处理，每个浓度均设计3个微孔;培养72小时后SRB法测定细胞增殖情况。 3.细胞凋亡实验，药物处理同功能实验联合用药组，培养72小时，流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果: 1.阿法替尼单独应用可抑制NSCLC NCI-H522、A549细胞株PI3K/AKT/mTOR下游蛋白p-EGFR、p-AKT、p-S6的表达，同时会诱导RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2表达增加。 2.GSK1120212单独应用可抑制NCI-H522、A549细胞株RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2的表达，同时会诱导PI3K/AKT/mTOR下游蛋白表达增加p-AKT表达增加。 3.阿法替尼与GSK1120212联合应用可以起到双通路互补抑制作用，p-AKT、p-S6、p-ERK1/2表达明显被抑制，GSK1120212能增强阿法替尼部分抑制效果。 4.阿法替尼与GSK1120212联合应用可以更明显地抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。 结论:阿法替尼联合GSK1120212应用起到PI3K/AKT/mTOR、RAS/MEK/ERK双通路抑制的效果，能更好地抑制NCI-H522、A549细胞的生长、增殖，促进细胞凋亡。 第二部分:阿法警尼与MEK抑制剂PD0325901联合应用于鳞癌细胞株UM-SCC-74B和JHU-O28 目的:探索阿法替尼与MEK抑制剂PD0325901联合应用对鳞癌细胞相关蛋白表达、细胞增殖和凋亡的作用。 方法: 1.细胞功能实验，于普通培养皿培养UM-SCC-74B和JHU-O28细胞株，分别分为三组:单药阿法替尼组、单药PD0325901组和联合用药组，每组内又接受4种不同的处理。单药阿法替尼组细胞分别用0（即对照组），2.5，5.0，10μMol/L终浓度的阿法替尼处理，单药PD0325901组细胞分别用0，1.0，2.0，4.0μMol/L终浓度的PD0325901处理，联合用药组分别用DMSO，5.0μMol/L阿法替尼，2.0μMol/L PD0325901，5.0μMol/L阿法替尼+2.0μMol/L PD0325901处理。培养24小时后收集细胞获取蛋白，westernblot技术检测p.-EGFR、p-AKT、p-S6、p-ERK1/2等蛋白的表达情况。 2.细胞增殖实验，用96孔板培养细胞，分3种处理，2组单药处理按0，0.125，0.25，0.5，1.0，2.0μMol/L终浓度进行药物处理，联合用药组采用1∶1联合用药处理，每个浓度均设计3个微孔;培养72小时后SRB法测定细胞增殖情况。 3.细胞凋亡实验，药物处理同功能实验联合用药组，培养72小时，流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果: 1.阿法替尼单独应用可抑制HNSCC UM-SCC-74B和O28细胞株PI3K/AKT/mTOR下游蛋白p-EGFR、p-AKT、p-S6的表达，同时会诱导RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2表达增加。 2.PD0325901单独应用可抑制UM-SCC-74B和JHU-O28细胞株RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2的表达，同时会诱导PI3K/AKT/mTOR下游蛋白表达增加p-AKT表达增加。 3.阿法替尼与PD0325901联合应用可以起到双通路互补抑制作用，p-AKT、p-S6、p-ERK1/2表达明显被抑制，PD0325901能增强阿法替尼部分抑制效果。 4.阿法替尼与PD0325901联合应用可以更明显地抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。 结论:阿法替尼与PD0325901联合应用可以起到PI3K/AKT/mTOR、RAS/MEK/ERK双通路抑制作用，明显抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。