血管生成抑制因子rh-K4K5快速表达转化子的筛选及介入治疗兔VX2肿瘤研究

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人angiostatin(human-angiostatin)是新近发现的新生血管抑制因子之一,它能特异抑制血管内皮细胞的增生和迁移.该研究应用载体质粒和酵母表达系统,筛选快速高效表达人纤溶酶原片段rh-K4K5的快速表达多拷贝转化子.用特定的限制性内切酶Sac I线性化含rh-K4K5 cDNA的表达质粒p9KKK-18,电穿孔法转化巴斯德毕赤酵母GS115,经YPD-G418平板筛选外源基因拷贝数,用PCR鉴定其整合状态,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达产物.含rh-K4K5 cDNA的转录单元以插入方式整合到酵母染色体中,该转化子甲醇诱导表达后,SDS-PAGE胶有浓集的、分子量约为25kD条带,纯品能显著抑制BCE细胞增殖,初步确认为目的蛋白.我们采用兔VX2模型观察经导管间断灌注重组血管生成抑制因子rh-K4K5对肿瘤生长的影响.结论:介入放射学途径动脉灌注重组血管生成抑制因子rh-K4K5治疗肿瘤,能有效抑制VX2肿瘤的生长.
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