【摘 要】
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细胞程序性死亡(PCD),是多细胞生物清除不必要的、多余的、受感染的或损坏细胞自主性死亡过程,在动植物正常生长发育和胁迫条件下都发挥着重要的作用。Bax inhibitor-1(BI-1)基
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细胞程序性死亡(PCD),是多细胞生物清除不必要的、多余的、受感染的或损坏细胞自主性死亡过程,在动植物正常生长发育和胁迫条件下都发挥着重要的作用。Bax inhibitor-1(BI-1)基因是目前在动植物中发现的少数几个调控PCD发生的同源基因,作为延缓或抑制生物或非生物胁迫引起死亡的重要调控因子,在植物的衰老及与胁迫的相互作用中发挥着重要的作用。本研究为明确该基因在番茄中的功能,特别是在番茄果实成熟衰老及各种胁迫中的作用,利用植物转化技术获得番茄 BI-1(LeBI-1)基因过表达(overexpression)和基因沉默的转基因植株,为LeBI-1基因功能的深入研究提供试材。
(1) 本实验克隆得到番茄Bax inhibitor-1(LeBI-1)基因,并成功构建了带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的pLeBI-1-EGFP中间载体。
(2) 将中间载体上的LeBI-1-EGFP序列酶切连接到pBI121,构建了番茄LeBI-1,基因正义表达载体pBI121-LeBI-1-EGFP和阳性对照表达载体pBI121-EGFP,并将这两种载体转化到农杆菌中;利用农杆菌介导的叶盘转化法转化番茄和烟草,PCR和Southern blot方法鉴定,得到了LeBI-1基因过表达的转基因番茄和烟草,为后续LeBI-1在番茄果实成熟过程和胁迫过程中的作用提供了转基因材料。
(3) 同时本实验成功构建了LeBI-1基因的转录后发夹式沉默(hpRNA)表达载体pGSA4285,为后面通过叶盘转化获得LeBI-1基因沉默的番茄植株提供了载体。
(4) 与野生型植株比较,LeBI-1基因过表达对番茄和烟草幼苗的正常生长没有显著的影响。
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