目的研究miR-148a及HK2基因对人乳腺癌细胞糖酵解代谢途径的影响和可能机制。方法荧光定量PCR(qPCR)检测miR-148a在乳腺癌细胞系(MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB231)中的表达情况;ELISA法检测葡萄糖的摄取量、建立标准曲线检测乳酸的生成量,BrdU法检测增殖情况,Western免疫印迹法检测HK2蛋白水平的变化。通过TargetScan对miR-148a与HK2的作用位点进行预测,并通过双荧光素酶报告实验验证miR-148a与HK2的靶向关系。然后采用CRISPR/Cas9技术敲除乳腺癌MCF-7细胞中HK2基因,观察该细胞对葡萄糖摄取、乳酸生成以及增殖情况。结果miR-148a在MDA-MB231中表达量显著降低(P<0.01);过表达miR-148a使MDA-MB231细胞的葡萄糖摄取量下降1.8倍(P<0.01)、乳酸生成量下降2.4倍(P<0.01),细胞增殖指标下降2.2倍(P<0.01);抑制miR-148a表达,MDA-MB231细胞葡萄糖摄取量上升1.6倍(P<0.01),乳酸生成量上升1.7倍(P<0.01),细胞增殖指标上升1.6倍(P<0.01)。TargetScan数据库预测miR-148a与HK2基因3’UTR具有部分结合位点;双荧光素酶报告实验发现miR-148a与基因野生型HK2 3’UTR荧光素酶报告载体结合,不与突变型HK2 3’UTR结合;过表达miR-148a使细胞中HK2蛋白表达量下降2.4倍(P<0.01),而抑制则促进关键酶HK2蛋白表达量上升1.2倍(P<0.05)。HK2基因过表达可使MDA-MB231乳腺癌细胞的葡萄糖摄取量上升1.6倍(P<0.01),乳酸生成量上升1.5倍(P<0.01),细胞增殖指标上升1.7倍(P<0.01);将过表达miR-148a载体与过表达HK2载体共转染MDA-MB231细胞,miR-148a则可逆转HK2所致葡糖糖摄取量增加和乳酸生成量上升效应,并抑制细胞增殖。在HK2基因缺陷型乳腺癌MCF-7细胞中,葡萄糖摄取量、乳酸生成量以及细胞增殖等均出现下降,间接证明miR-148a调控HK2基因表达而影响细胞糖酵解的机制。结论miR-148a可通过靶向抑制HK2表达而抑制乳腺癌MDA-MB231细胞糖酵解代谢和细胞增殖,通过构建HK2基因缺陷型细胞株间接验证了该机制正确性。图14幅;表12个;参90篇。