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对乙酰氨基酚（Acetaminophen,APAP）是一种常见的解热镇痛药物,但过量使用会引发严重的肝损伤。葛根素是从植物葛根中分离得到的一种异黄酮类活性物质,具有显著的抗氧化活性和保肝作用。基于氧化应激是APAP诱导肝损伤的关键原因,而Nrf2作为机体抗氧化应激反应的关键调控因子,对改善和缓解急性肝损伤发挥着至关重要的作用。本研究拟从机体和细胞水平两方面研究葛根素对APAP诱导的肝损伤的影响,并探讨其潜在的保护机制是否和激活Keap1/Nrf2信号通路有关,阐明葛根素对APAP诱导的肝损伤的保护机制。主要的研究内容及结果如下:1葛根素对APAP诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用分别使用200、400、800 mg/kg的葛根素连续灌胃小鼠7 d,每天一次,末次灌胃2 h后使用300 mg/kg的APAP腹腔注射建立急性肝损伤模型,禁食24 h后取样。采用病理组织学观察、血生化检查、分光光度法、JC-1荧光探针法等方式研究葛根素对肝损伤小鼠肝组织结构、肝功能、氧化应激及线粒体膜电位的影响。结果:（1）APAP导致小鼠肝脏脏器指数增高,中央静脉周围肝细胞发生坏死,失去索状结构。中、高剂量葛根素预处理后,能显著降低肝脏脏器指数,改善肝组织的病理变化。（2）葛根素能降低急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、AKP、γ-GT和TBIL的含量,缓解肝功能损伤。（3）葛根素能提高APAP诱导的小鼠急性肝损伤肝脏中GSH、SOD、CAT的含量,并降低MDA、ROS的肝内蓄积,从而减轻肝脏氧化应激。（4）葛根素可显著抑制APAP所致急性肝损伤小鼠肝细胞线粒体膜电位的下降,缓解线粒体功能障碍。结论:葛根素主要通过发挥抗氧化活性对APAP诱导的急性肝损伤小鼠产生保护作用。2葛根素对APAP诱导的Hep G2细胞氧化损伤的保护作用在体内研究的基础上,拟在细胞水平上研究葛根素对肝细胞的保护作用。使用CCK-8法分别检测不同浓度的APAP和葛根素处理下的细胞活性,确定APAP的造模浓度和葛根素用药浓度。之后,再对细胞进行分组处理,采用分光光度法、DCFH-DA荧光探针法、JC-1荧光探针法等方式研究葛根素对Hep G2细胞功能、氧化损伤程度以及线粒体膜电位的影响。结果:（1）当APAP浓度为10 m M时细胞存活率为77%,可用于构建氧化损伤细胞模型;当葛根素浓度小于等于60μM时对细胞活性无显著影响,因此葛根素的用药浓度应控制在60μM以内,设计15、30、60μM作为用药剂量。（2）细胞分组处理之后,葛根素能显著下调Hep G2细胞培养液中的ALT和AST含量水平,提高细胞内GSH、SOD、CAT的含量以及降低MDA、ROS的含量,从而缓解细胞的氧化损伤。（3）葛根素可显著恢复APAP导致的Hep G2细胞线粒体膜电位的下降,缓解线粒体功能障碍。结论:葛根素主要通过缓解氧化应激对APAP所致Hep G2细胞损伤发挥保护作用。3葛根素对Keap1/Nrf2信号通路的影响3.1葛根素对小鼠肝脏Keap1/Nrf2信号通路的影响:Nrf2信号通路是机体氧化应激反应的调节中枢,本研究利用APAP构建小鼠急性肝损伤模型,通过q PCR、Western Blot等实验技术,检测不同浓度葛根素预处理后对肝脏Keap1/Nrf2信号通路相关蛋白Keap1、Nrf2、GCLC、GCLM、HO-1、NQO1转录和表达的影响,初步从信号通路的角度探讨葛根素能否在小鼠体内通过激活Nrf2信号通路从而对肝脏发挥保护作用。结果:和模型组相比,葛根素能从转录和翻译水平两方面下调小鼠肝脏中Keap1的表达量,上调Nrf2信号通路下游GCLC、GCLM、HO-1、NQO1的表达。结论:葛根素通过激活小鼠肝脏Nrf2信号通路,促进通路下游抗氧化蛋白的表达从而对APAP诱导的急性肝损伤发挥保护作用。3.2葛根素对Hep G2细胞Keap1/Nrf2信号通路的影响:利用APAP构建Hep G2细胞氧化损伤模型,通过q PCR、Western Blot等实验技术,检测不同浓度葛根素预处理后对细胞Keap1/Nrf2信号通路相关蛋白Keap1、Nrf2、GCLC、GCLM、HO-1、NQO1转录和表达的影响;随后再分别测定Nrf2蛋白在细胞质和细胞核中的表达量,探讨葛根素是否通过促进Nrf2的核迁移激活Nrf2信号通路,从而对肝细胞发挥保护作用。结果:葛根素能从转录和翻译水平两方面下调Hep G2细胞中Keap1的表达量,促进Nrf2的核转移,从而提升下游抗氧化相关蛋白GCLC、GCLM、HO-1和NQO1的表达。结论:葛根素能通过抑制Keap1的表达来促进Nrf2的核转移,激活Nrf2信号通路,从而对APAP处理的Hep G2细胞发挥保护作用。综上所述,葛根素通过影响肝脏脏器指数、肝细胞病理变化、血清生化指标、肝脏抗氧化物含量和线粒体膜电位等对APAP诱导的急性肝损伤发挥保护作用;细胞实验中,葛根素通过影响细胞活性、细胞培养液生化指标、细胞内抗氧化物含量和线粒体膜电位等对APAP诱导的氧化损伤Hep G2细胞产生保护作用。其机制为葛根素能发挥抗氧化活性,是通过抑制Keap1的转录和翻译从而促进Nrf2的核转移,以此激活抗氧化反应元件下游基因GCLC、GCLM、NQO1、HO-1的表达来实现。