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第一部分构建高表达FOXP3的MDA-MB-231细胞株目的:叉头框转录因子P3（Forkhead box P3,FOXP3）近些年来被发现其表达影响着肿瘤的发生、发展,乳腺癌及多种恶性肿瘤细胞中均有FOXP3表达。有研究表明,FOXP3在体外实验中为抑癌基因,实验显示乳腺及前列腺上皮细胞的FOXP3表达缺失将促进肿瘤的生长。随着相关研究的进展,某些新的靶点可能成为治疗乳腺癌的突破口。这些靶基因或者生物标志物将对乳腺癌的生长、预后以及治疗等方面有非常重要的作用,从而为乳腺癌的诊断、转移机制及治疗提供新思路。本研究以人乳腺癌MDA-MB-231细胞株为模型,通过FOXP3质粒转染使FOXP3基因高表达,从而为研究FOXP3对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响奠定基础。方法:构建FOXP3高表达的携带增强荧光蛋白eGFP的细胞株（MDA-MB-231-FOXP3）并将携带eGFP的细胞株（MDA-MB-231-NC）作为阴性对照,MDA-MB-231细胞株为空白对照。Western blot法检测FOXP3蛋白水平的表达。运用实时荧光定量PCR（SYBR Green）法检测FOXP3转录水平的表达。结果:成功构建（MDA-MB-231-FOXP3）,实时定量PCR检测FOXP3的表达,结果显示,在高表达模型中,与MDA-MB-231-NC组相比,MDA-MB-231-FOXP3细胞中FOXP3表达上升（38.59±4.08）,差异有统计学意义（P<0.001）;Western blot法中应用Image J软件测灰度值,结果显示:与阴性对照组（MDA-MB-231-NC）相比,MDA-MB-231-FOXP3细胞中FOXP3表达上调（0.94±0.04）,差异有统计学意义（P<0.05）。MDA-MB-231-NC与MDA-MB-231组相比无论是PCR还是Western结果均无统计学差异。第二部分FOXP3对乳腺癌MDA-MB-231细胞系生物学行为的影响目的:FOXP3在多数体外实验中表现为抑癌基因,但临床研究表明FOXP3高表达与恶性肿瘤患者愈后呈负相关。研究表明FOXP3与多种实体瘤的生长、发展及浸润转移密切相关,但二者关系尚不明确。因此本实验选取低表达FOXP3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系,探究FOXP3对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法:1倒置显微镜下观察转染细胞形态,运用CCK-8法检测高表达FOXP3对MDA-MB-231细胞增殖的影响,利用细胞划痕实验检测高表达FOXP3细胞株对细胞迁移的作用,利用TranswellTM检测对细胞侵袭能力的影响。2应用SPSS13.0统计软件进行数据分析,两独立样本的比较应用t检验分析,多组数据间均数的相互比较应用单因素方差分析,多样本均数间的多重比较应用Tukey检验分析,数据运用mean±SD表示,每组实验不少于3个独立样本的重复,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.显微镜观察得出:MDA-MB-231和MDA-MB-231-NC组与MDA-MB-231-FOXP3组细胞形态无明显变化。2.增殖能力:MDA-MB-231组与MDA-MB-231-NC组相比,细胞增殖未见明显差异,而MDA-MB-231-FOXP3组细胞增殖能力相较前两组明显减弱（P<0.001）。3.细胞迁移能力:MDA-MB-231（0.49±0.01）和MDA-MB-231-NC（0.47±0.02）组与MDA-MB-231-FOXP3（0.33±0.02）组细胞相比,MDA-MB-231-FOXP3组细胞迁移能力较前两组明显减弱（P<0.01）。4.细胞的侵袭能力:MDA-MB-231-FOXP3组穿膜细胞数为（242.4±7.95）与MDA-MB-231（393.0±4.84）和MDA-MB-231-NC（366.4±6.94）组相比较,侵袭能力明显减弱（P<0.0001）。结论:1.成功构建稳定高表达FOXP3的MDA-MB-231-FOXP3细胞模型及相应阴性对照细胞株MDA-MB-231-NC。2.FOXP3可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭能力,但其具体作用机制仍然不清楚,需要我们进一步探索。