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猪脑心肌炎(Encephalomyocarditis,EMC)是由脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的一种自然疫源性人兽共患传染病。EMCV在世界范围内广泛分布,具有广泛的宿主谱,主要引起脑炎、心肌炎或心肌周围炎以及母猪的繁殖障碍。猪最易感,仔猪常未表现出任何症状突然死亡。偶尔导致动物园黑猩猩、华南虎、非洲象等野生动物死亡,人偶尔出现发热等临床症状,大多数以亚临床形式存在。 本研究从河南某猪场临床症状表现为心肌炎及心肌周围炎的病死仔猪病变组织中鉴定到EMCV核酸阳性。所得阳性样品研磨液过滤后接种BHK-21细胞,盲传至第5代,细胞表现出CPE,收取病毒液,进行RT-PCR鉴定,经测序和序列比对,确定为EMCV。并从上述病料中成功分离到5株猪源EMCV,分别命名为XX1、XX2、XX3、ZM和JX。设计了五对特异性引物扩增EMCV ORF区,扩增产物经测序后进行拼接,完成ORF区完整测序。3UTR和5UTR分别利用3RACE和5RACE进行扩增,测序后与ORF拼接,得到完整基因组序列,结果上传GeneBank。分析核苷酸序列,新分离到的五株病毒没有较大的变异,在系统发育分析上与中国大陆、韩国分离株处在同一分支,与心肌炎型EMCV同源性较高,分离到的五株为心肌炎型EMCV。最后用XX1分离株对Balb/c小鼠进行了致病性研究,结果表明XX1分离株能引起小鼠发病、便血及死亡,剖检发现肠道有多处出血点,病理组织切片显示,小鼠心、脑、肺、肝、肾和睾丸组织有大量红细胞、单核细胞等炎性细胞聚集,表明分离株对Balb/c小鼠具有较高致病性。本研究不仅从病原学角度明确了我国猪群中EMCV的存在,而且为致病分子机制及跨种传播机制的深入研究奠定了物质基础。 NASBA是一种快速、简便、可靠的诊断技术,且不需要复杂精密的仪器设备。本研究优化了NASBA方法应用于EMCV特异性检测。EMCV-NASBA方法的建立和应用对检测效率提高、EMC大范围调查以及检测成本的降低有很大推动作用。 对河南猪场从业人员及伴生鼠群现场流行病学调查发现,大猪场鼠群阳性率为17.24%,小猪场鼠群阳性率为38.23%;大猪场员工EMCV阳性率为5.56%,小猪场员工EMCV阳性率为12.70%;大小猪场员工总的阳性率为8.19%,大小猪场EMCV防治认知水平显著差异,大猪场员工EMCV防治认知水平高从而EMCV感染率相对低,小猪场员工EMCV防治认知水平低从而EMCV感染率相对高。171个调查对象中,男性血清抗体阳性率为11.54%(9/78),女性为5.38%(5/93),男性员工的感染率比女性员工高,这可能是由于男性员工更多的与猪群接触;45岁至59岁年龄段的人数为93人,所占总人数比例为54.39%,血清抗体阳性率为9.68%(9/93);60岁以上年龄段的人数为43人,所占总人数比例为25.15%,血清抗体阳性率为9.30%(4/43)。表明年龄在45岁以上的员工感染EMCV的比例更高,可能与他们更长的工作时间,较低的免疫抵抗力或其它风险因子相关。 综合分离株遗传演化分析、小鼠致病性研究和现场流行病学调查研究结果,表明河南地区流行毒株具有较高的致病性、且具有较强的多宿主适应能力和传播能力,在猪、鼠、人群循环传播。本研究从粪便中检测到EMCV核酸,表明EMCV在环境中的生存能力极强,推测EMCV主要通过粪口途径传播,伴生鼠先传播给猪,猪再传播给猪场从业人员,或者猪场从业人员接触伴生鼠的粪便或尸体后,没有洗手就进食,就极大可能被感染,通过提高防治认知水平可降低猪场从业人员感染EMCV风险。因此,猪源EMCV的公共卫生学意义值得关注。提出几点建议:一,增强从事养殖的农民的疫病防控知识和操作方法;二,加强与家养动物或野生动物近距离接触高危人群的血清流行病学调查,为制定科学合理的动物源性传染病防控措施提供依据。