拟南芥鞘氨醇去饱和酶的功能研究

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鞘脂(sphingolipid)由鞘氨醇骨架、长链脂肪酸和极性头部基团组成。鞘脂是除了磷脂以外的第二大类膜脂,是细胞膜的重要结构成分。神经酰胺是鞘脂类共有的结构单位。近二十年来的研究表明真核生物中的鞘脂及它的代谢中间物也是重要的信号分子,其中研究的最多的是神经酰胺(Ceramide)和鞘氨醇-1-磷酸(Sphingosine-1-phosphate,S1P)。  高等植物中鞘脂的结构复杂、种类繁多、功能未知。鞘氨醇骨架(Long chainbase,LCB)包含2种修饰,即4号位的羟基化(C-4 hydroxylation),4号位及8号位的去饱和(desaturation)修饰。研究发现S1P在脱落酸调控保卫细胞气孔关闭过程中发挥重要作用。本文通过构建拟南芥双突变体des8-1/des8-2研究了鞘氨醇骨架8号位去饱和酶(△8 LCB desaturase,DES8)的功能。RT-PCR实验发现,DES8-1基因在各个组织中均表达,但DES8-2在花中表达量最高。亚细胞定位实验发现,DES8-1和DES8-2分别与ER Marker蛋白AtWAK2共定位,  表明这两个基因的产物均定位于内质网上。在des8-1/des8-2中,8号位LCB去饱和产物显著减少,特别是葡萄糖神经酰胺总含量显著降低。在正常生长条件下,突变体与野生型相比没有明显表型,但是经过干旱处理后,突变体耐早能力减弱。气孔观察实验发现,突变体气孔直径比野生型增加1μm。体外失水实验表明,相同时间内突变体比野生型失水快。小液流法测叶片的水势发现,突变体比正常型拟南芥叶片水势显著降低。以上结果提示拟南芥DES8可能作为S1P的底物调控植物抗逆反应,或通过参与葡萄糖神经酰胺合成维持细胞膜的稳定性。
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