水中真菌孢子的萌发特性与消毒控制

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饮用水真菌污染与人类健康和疾病爆发密切相关,如今已逐渐受到关注,真菌污染不仅会导致水的色、嗅、味改变,还会产生真菌毒素等代谢产物破坏人体免疫系统,继而引发许多疾病。真菌萌发后与其分泌的胞外聚合物构成生物膜,广泛存在于水库、河流、湖泊和湿地等自然水体以及供水管网中,严重影响水质安全。此外,与休眠真菌孢子相比,萌发态真菌孢子的代谢活性更高,并能在萌发后繁育出新个体,从而表达出更多的毒性因子,而这些毒素、致病性因子和免疫刺激成分的释放则会对人类健康造成更大的威胁。截至目前,绝大部分对水中真菌孢子消毒的研究都着眼于对休眠真菌孢子的灭活效果和机理分析,而在水中萌发态真菌孢子的灭活规律,运用流式细胞仪和扫描电镜分析灭活机理方面缺乏系统研究。本文探明了地下水中常见条件致病菌黑曲霉和波兰青霉孢子的萌发规律和影响因素,利用显微镜、扫描电镜和流式细胞仪结合多种染色剂,研究了真菌孢子在萌发过程中的形态学和生理学变化,并通过三种常见化学消毒剂(氯、氯胺和二氧化氯)和一种物理消毒方式(紫外线照射)对休眠和不同萌发率的真菌孢子进行消毒处理,结合流式细胞仪研究了真菌孢子灭活过程中膜完整性、酯酶活性和胞内ROS等生理学变化,并通过扫描电镜观察了灭活过程中真菌孢子的形态学变化。得出以下结论:(1)热活化有助于真菌孢子萌发,优化后的热活化条件为:曲霉孢子在50℃下处理7 min,青霉孢子在45℃下处理5 min。曲霉孢子的热抗性高于青霉孢子,碳、氮、磷源及其他微量元素会影响真菌孢子的萌发,中性条件和低孢子浓度有助于真菌孢子萌发;(2)真菌孢子萌发首先各向同性生长,之后会长出芽管,长出芽管即视为真菌孢子萌发。在萌发过程中,真菌孢子的尺寸和颗粒度增加,同时伴随着DNA复制,膜完整性降低,酯酶活性增加和胞内ROS水平升高等生理学变化,芽管伸长后可能会逐渐形成菌丝体,最终长成生物膜;(3)三种氯基消毒剂灭活休眠曲霉孢子均有延滞期,并且随着消毒剂浓度的增加,灭活休眠曲霉的延滞期缩短,而对于消毒剂抗性较弱的休眠青霉孢子,仅氯胺处理时有延滞期,三种氯基消毒剂灭活萌发态真菌孢子均没有延滞期,这可能是因为萌发孢子的膜渗透;(4)对休眠和萌发态真菌孢子的灭活效果依次是:二氧化氯>紫外线>氯≈氯胺,在消毒处理过程中,真菌孢子首先失去可培养性,然后膜完整性损伤,酯酶活性降低,胞内ROS含量先升高后有降低趋势,同时孢子变得褶皱、凹陷,胞内物质外泄,最终孢子死亡;(5)三种氯基消毒剂对休眠和萌发态真菌孢子酯酶活性影响程度依次是:二氧化氯>氯>氯胺,四种消毒方式(三种氯基消毒剂处理和低压紫外线照射)对休眠和萌发态真菌孢子膜完整性损伤程度和胞内ROS影响程度依次是:二氧化氯>氯>氯胺>紫外线。
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