【摘 要】
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目的:克隆新发现的人Lamda3和Epsilon干扰素基因。目前对这两个干扰素的研究很少,因此我们通过RT-PCR获得这两个干扰素的全长cDNA,并重组到真核表达载体,转染真核细胞,在真核
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目的:克隆新发现的人Lamda3和Epsilon干扰素基因。目前对这两个干扰素的研究很少,因此我们通过RT-PCR获得这两个干扰素的全长cDNA,并重组到真核表达载体,转染真核细胞,在真核系统中进行重组表达并检测表达蛋白的生物学活性。 方法:分别从病毒或细胞因子刺激的细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得人干扰素lamda3(hIFN-λ3)和epsilon (hIFN-ε)基因。将其重组到pcDNA3.1/myc-his(-)A真核表达质粒,经测序鉴定后,将构建的重组质粒pcDNA3.1 A-hIFN-λ3和pcDNA3.1 A-hIFN-ε分别导入真核细胞COS-7或CHO细胞进行瞬时或稳定表达,研究表达产物的功能及生物学活性。 结果:通过PCR、酶切鉴定和测序证明成功的获得了603bp的人hIFN-λ3和627bp的人hIFN-ε基因,且序列测定结果与GenBank报道的完全一致,真核重组表达质粒构建正确。结果显示hIFN-λ3和hIFN-ε基因不仅可在COS-7或CHO细胞中表达,而且表达的rhIFN-λ3蛋白具有抗病毒活性;rhIFN-ε蛋白不仅具有抗病毒活性,还具有抗增殖活性,其抗病毒分子机理可能与诱导细胞产生MxA抗病毒蛋白有关,为今后干扰素的基因重组药物研制奠定了基础。 结论:我们成功的获得了hIFN-λ3和hIFN-ε基因,并在真核细胞中得
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