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目的探讨自噬与Wnt信号通路在神经缺氧缺血损伤中是否存在相互作用及其互相影响的机制。方法选取怀孕14~15天的SD大鼠,取胎鼠,分离皮层,进行原代细胞培养,6~8天后免疫细胞化学法鉴定神经元。将细胞分为对照组和处理组,按照分组(1,6,12,24h)进行相应时间的糖氧剥离处理。分别在(1,6,12,24h)收集细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定LC3II/LC3I、P62、Beclin-1、Wnt1、Wnt3a、β-Catenin的蛋白水平表达;选用处理12 h组作为干预时间点,予自噬激动剂雷帕霉素(Rapamycin)和自噬抑制剂3-MA处理,检测Wnt1、Wnt3a、β-Catenin蛋白表达。结果1.随着糖氧剥离造模缺氧时间的延长,HIF-1α表达量逐渐增加。说明随着缺氧时间的延长,皮层神经元的缺氧缺血性损伤程度加重。缺氧时间达24h时,HIF-1α表达量最高。2.Western blot检测发现,LC3II的表达随着糖氧剥离时间的延长,逐渐增多;Beclin-1的表达与糖氧剥离时间呈正相关;p62的表达随着糖氧剥离时间的延长,逐渐减少。表明在糖氧剥离诱导的缺氧缺血损伤中,自噬随着损伤时间的延长而增强。糖氧剥离缺氧时间达24h时,LC3II和Beclin-1表达最高,p62表达最低。3.检测启动蛋白Wnt1、Wnt3a,以及下游蛋白β-Catenin的表达,Wnt1和Wnt3a的表达随着糖氧剥离时间延长,呈现持续上调趋势。β-Catenin在糖氧剥离开始后,表达上调,但是随着糖氧剥离时间的延长,呈现下降趋势。选用糖氧剥离缺氧12 h作为干预时间点,给予自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)及抑制剂3-Methyladenine(3-MA),通过上调及下调自噬水平,检测Wnt信号通路主要蛋白的表达,分析自噬在缺氧缺血条件下对Wnt信号通路的调节作用。Wnt1和Wnt3a的表达与LC3II的变化趋势相似,β-Catenin的表达,3-MA+糖氧剥离组与对照组相比,显著增高,Rap+糖氧剥离组显著降低,与自噬的变化趋势相反。以上结果提示,Wnt上游信号通路启动与自噬启动一致,而Wnt下游蛋白的表达,与自噬活动相反。结论Wnt上游信号通路的启动与自噬启动一致,而Wnt下游蛋白的表达,则与自噬活动相反。