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目的:研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对人胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方法:QBC939细胞系经复苏后,取生长状态良好的细胞用于实验。实验分加药组和对照组,加药组用含有不同浓度的NCTD培养,对照组用DMEM培养液培养。作用一定时间后用下述几种方法进行检测:(1)MTT实验:将细胞接种于96孔板,24h后弃去上清,实验组分别加入浓度为0.125、0.75、2.5、10、120μg/ml的培养液,对照组加入不含NCTD的培养液;作用48h后,每孔加入MTT液25μl,继续孵育约4-8小时;弃去上清,加入DMSO 100μl10min,振荡至结晶物充分溶解,上机检测每孔光吸收值(A)。用同样的方法在NCTD分别作用12h、24h、36h、48h、72h检测每孔光吸收值。(2)细胞周期和凋亡测定:将生长状态良好的QBC939接种于6孔板中,24小时后,加入相应浓度的NCTD,48小时后将细胞消化下,经过PBS洗涤、酒精固定,最后加入PI避光、室温放置约20分钟后,上机检测。(3)免疫组化SP法检测caspase-3蛋白:将细胞接种于放有盖玻片的六孔板中,24小时贴壁后,分别加入0.125、0.75、2.5、10μg/ml的NCTD培养液,对照组加DMEM培养液,孵育箱内培养48小时后,按照试剂盒说明书进行操作。运用B12000图像分析系统进行数据采集。结果:(1)MTT实验:NCTD在浓度为0.125、0.75、2.5、10、120μg/ml,作用时间为48小时时,对QBC939细胞系均有抑制作用(F=2.63,P=0.007),生存率分别为(94±10)%、(77±12)%、(47±5)%、(26±4)%、(15±3)%,具有浓度依赖性,绘制浓度效应曲线,得出半数抑制浓度(IC50)=(3.66±1.14)μg/ml;在作用不同时间后,从实验结果看,生存率有随时间增加下降的趋势(F=2.40,P=0.0127)。(2)细胞周期和凋亡测定:结果表明,不同浓度的NCTD干预QBC939后,不同浓度的凋亡率差别有统计学意义(P<0.001),随着NCTD浓度的增加,凋亡率逐渐增大;浓度为2.5μg/ml的NCTD作用QBC939细胞48小时后,FCM测定G2-M期细胞的百分率高于对照组,两者比较差异有显著性(P<0.05)。(3)免疫组化SP法检测caspase-3蛋白:不同浓度的NCTD作用于QBC939细胞后,与对照组相比,不同浓度之间的平均灰度总体均数不全相等(F=223.103,P<0.001),LSD两两比较除0.125μg/ml,0.75μg/ml两组间差别无统计学意义外,其它任意两组间差别有统计学意义(P<0.05)。在浓度为0.75、2.5、10μg/ml时,随浓度的增加,蛋白表达增强。结论:NCTD具有抑制人胆管癌细胞系QBC939增殖的作用,这种作用可能与诱导细胞凋亡,干扰细胞生长周期有关。