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目的:构建尿酸氧化酶(Uricase,Uox)基因敲除的原发性高尿酸血症小鼠模型,并进行表型初探。
方法:1、应用现有较先进的类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)的靶向基因修饰技术构建Uox基因敲除的原发性高尿酸血症小鼠模型。应用杂合子之间相互交配的方式扩群,获得大量子代纯合子及同窝野生型小鼠。采用PCR、Real-timePCR及Westernblot技术方法分别在DNA水平、mRNA水平及蛋白水平对该模型的敲除效率进行验证。2、模型制备成功后,观察F2代纯合子及同窝野生型小鼠的基本表型,包括一般情况、体重等;检测各相关指标,包括血尿酸、肝肾功、血糖、血脂等;解剖肾脏、踝关节、主动脉、肝脏、胰腺、脾脏、脑组织做病理切片及苏木素-伊红染色。
结果:1、成功获得Uox基因敲除纯合子的小鼠。由于Uox基因在肝脏中高表达,而在其他组织几乎不表达,抽取肝脏mRNA和蛋白,Real-timePCR和Westernblot结果验证纯合子小鼠几乎不表达UoxmRNA和蛋白。2、观察到8周龄的Uox纯合子小鼠和同窝野生型小鼠的一般情况无明显差异。Uox纯合子小鼠出生率为15.95%,低于孟德尔遗传定律的25%。体重方面,纯合子较同龄其他类型小鼠稍轻。雌雄纯合子小鼠的血尿酸值均明显高于同窝野生型。肾功方面,雌雄纯合子小鼠的尿素氮和肌酐均明显高于同窝野生型。血糖、血脂方面,雌雄纯合子小鼠的随机血糖值、总胆固醇高于同窝野生型,雌性纯合子小鼠的甘油三酯高于同窝雌性野生型而雄性小鼠结果则相反。病理结果显示,纯合子小鼠肾脏大体见肾盂积水,切片见肾单位结构异常,鲍曼氏囊扩张,肾间质纤维化并伴有炎性细胞浸润。而其他组织包括踝关节、主动脉、肝脏、胰腺、脾脏、海马、纹状体在纯合子及野生型小鼠中无明显差异。
结论:纯合子小鼠血尿酸值明显高于同窝野生型,肾功检测尿素氮、肌酐不同程度升高,肾脏病理结果示肾盂积水,肾单位结构异常,这些结果均支持该尿酸氧化酶基因敲除的原发性高尿酸血症小鼠模型构建成功。其他生化指标中,血糖值、总胆固醇及甘油三酯也有所升高。尿酸氧化酶基因敲除小鼠为今后深入研究高尿酸血症机制及药物评估做好了疾病模型的准备。
方法:1、应用现有较先进的类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)的靶向基因修饰技术构建Uox基因敲除的原发性高尿酸血症小鼠模型。应用杂合子之间相互交配的方式扩群,获得大量子代纯合子及同窝野生型小鼠。采用PCR、Real-timePCR及Westernblot技术方法分别在DNA水平、mRNA水平及蛋白水平对该模型的敲除效率进行验证。2、模型制备成功后,观察F2代纯合子及同窝野生型小鼠的基本表型,包括一般情况、体重等;检测各相关指标,包括血尿酸、肝肾功、血糖、血脂等;解剖肾脏、踝关节、主动脉、肝脏、胰腺、脾脏、脑组织做病理切片及苏木素-伊红染色。
结果:1、成功获得Uox基因敲除纯合子的小鼠。由于Uox基因在肝脏中高表达,而在其他组织几乎不表达,抽取肝脏mRNA和蛋白,Real-timePCR和Westernblot结果验证纯合子小鼠几乎不表达UoxmRNA和蛋白。2、观察到8周龄的Uox纯合子小鼠和同窝野生型小鼠的一般情况无明显差异。Uox纯合子小鼠出生率为15.95%,低于孟德尔遗传定律的25%。体重方面,纯合子较同龄其他类型小鼠稍轻。雌雄纯合子小鼠的血尿酸值均明显高于同窝野生型。肾功方面,雌雄纯合子小鼠的尿素氮和肌酐均明显高于同窝野生型。血糖、血脂方面,雌雄纯合子小鼠的随机血糖值、总胆固醇高于同窝野生型,雌性纯合子小鼠的甘油三酯高于同窝雌性野生型而雄性小鼠结果则相反。病理结果显示,纯合子小鼠肾脏大体见肾盂积水,切片见肾单位结构异常,鲍曼氏囊扩张,肾间质纤维化并伴有炎性细胞浸润。而其他组织包括踝关节、主动脉、肝脏、胰腺、脾脏、海马、纹状体在纯合子及野生型小鼠中无明显差异。
结论:纯合子小鼠血尿酸值明显高于同窝野生型,肾功检测尿素氮、肌酐不同程度升高,肾脏病理结果示肾盂积水,肾单位结构异常,这些结果均支持该尿酸氧化酶基因敲除的原发性高尿酸血症小鼠模型构建成功。其他生化指标中,血糖值、总胆固醇及甘油三酯也有所升高。尿酸氧化酶基因敲除小鼠为今后深入研究高尿酸血症机制及药物评估做好了疾病模型的准备。