【摘 要】
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全文包括三个部分:第一部分:体外分离和扩增SD大鼠骨髓MSC,分析细胞接种密度对其增殖能力的影响,MSC细胞表型的鉴定、MSC超微结构的观察.第二部分:利用细菌内同源重组的方法
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全文包括三个部分:第一部分:体外分离和扩增SD大鼠骨髓MSC,分析细胞接种密度对其增殖能力的影响,MSC细胞表型的鉴定、MSC超微结构的观察.第二部分:利用细菌内同源重组的方法构建EGFP(enhanced green fluorescenceprotein,EGFP)、CCRK(cell cycle related kinase),BDNF(brain derived neurotrophicfactor)、p38、MEK1和ERK复制缺陷型腺病毒;用带有GFP标记的复制缺陷型腺病毒探讨腺病毒感染rMSC的效率;复制缺陷型腺病毒感染MSC最佳滴度;复制缺陷型腺病毒感染前后MSC表型的观察;复制缺陷型腺病毒感染后MSC分化潜能;不同滴度复制缺陷型腺病毒感染对MSC的细胞周期影响;复制缺陷型腺病毒介导基因转移与脂质体介导的基因转移效率比较;带有GFP标记的复制缺陷型腺病毒感染rMSC在新西兰大白兔肌肉内的表达.第三部分:建立用β-巯基乙醇诱导rMSC分化为神经样细胞细胞分化模型,免疫组化鉴定神经样细胞表型和电镜观察其分化前后的超微结构的变化,用Western-Blot方法观察正常MSC和分化为神经样细胞过程中的p38和ERK的变化;用p38和ERK的特异性阻断剂SB203580和PD98059观察对MSC和分化为神经样细胞过程的影响;用Ad-CCRK,Ad-BDNF、Ad-MEK1(CA)、Ad-ERK2(wild)和Ad-p38(AGF,mutant)腺病毒感染观察对MSC分化的影响.
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