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奶牛乳房炎是奶牛最常发生的疾病之一,给养殖业带来了巨大的经济损失。病原菌感染是奶牛乳房炎最主要的病因。为了了解江苏不同地区的奶牛乳房炎的发病情况和主要病原菌流行情况,本研究分别在江苏省3个不同地区的5个规模化奶牛场采集乳房炎奶样,进行病原菌分离,并对分离的葡萄球菌在药物敏感性及其部分耐药基因进行了分析。研究内容一、江苏部分地区奶牛乳房炎的病原学调查对江苏地区5个规模化奶牛场采集的610份奶样,进行细菌分离培养、生化鉴定和16SrDNA PCR鉴定。并以某牛场做为连续跟踪、观察试验牛场,从2012年11月至2013年10月的每月下旬,用BMT法监测乳房炎发病率,采集乳房炎奶样,进行细菌分离鉴定。经统计分析,结果显示：试验牛场乳房炎的平均发病率为31.2%。临床乳房炎的平均发病率为7.2%。隐性乳房炎的平均发病率为24.1%。江苏地区的乳房炎细菌主要是葡萄球菌,占47.8%,其中金黄色葡葡球菌的分离率为20.0%,CNS的分离率为27.8%；链球菌次之,占28.9%。本研究结果表明葡萄球菌可能是引起江苏地区奶牛乳房炎的主要致病菌。研究内容二、奶牛乳房炎葡萄球菌的耐药性检测本研究选取针对葡萄球菌的8类20种药物,用K-B法对江苏地区分离的383株葡萄球菌进行药敏试验。结果显示：受检葡萄球菌普遍存在多重耐药,耐4重药物以上的菌株占60.1%。葡萄球菌对青霉素、大观霉素、多粘菌素B和复方新诺明的耐药率均在60%以上,其中青霉素的耐药率最高,达到84.9%。可用于临床治疗的高敏药物有万古霉素、磷霉素、呋喃妥因、克拉霉素和米诺环素等抗生素。本研究结果表明葡萄球菌的耐药谱广泛,应当引起临床重视。这为临床防治提供理论依据。研究内容三、奶牛乳房炎葡萄球菌部分耐药基因的分析本研究对p-内酰胺类抗生素、红霉素和四环素相关的耐药基因(blaZ、ermC、tetK、 tetL、tetM、tetO)等进行了PCR扩增。参照文献和Genbank中的相关序列设计引物,从葡萄球菌基因组中扩增出blaZ、ermC、tetK、tetL、tetM等耐药基因,经序列分析表明扩增获得的片段其基因序列与Genbank中参考序列同源性均达到99%以上。对分离保存的383株奶牛乳房炎源性葡萄球菌进行药物抗性基因的分子流行病学检测,结果发现,p-内酰胺类抗生素的耐药基因blaZ的检出率最高,26.1%,红霉素的耐药基因ermC检出率为1.6%,四环素的耐药基因tetK、tetL、tetM的检出率分别为14.1%、1.0%和1.3%,未检测到tetO。综合耐药基因检测结果和耐药性检测结果分析表明,耐药基因检出率的低于其相关药物的耐药率。分析原因葡萄球菌对这些抗生素产生耐药的耐药机制可能是其它耐药基因编码或者是其它耐药机制。本研究表明葡萄球菌耐药机制复杂,可能是奶牛乳房炎防控困难的一个主要因素。